神経分化、再生におけるGDNF/Ret系の機能解析

GDNF/Ret系统在神经分化与再生中的功能分析

• 批准号: 11770116
• 负责人: 岩下 寿秀
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770116/
• 关键词: RETプロトオンコジーン; 多発性内分泌腫瘍症2型; GDNF; チロシンキナーゼ; ヒルシュスプルング病

RETプロトオンコジーン(以下RET)はGDNF(グリア細胞株由来神経栄養因子)、NTN等のGDNFファミリーをリガンドとする受容体型チロシンキナーゼをコードし、甲状腺髄様癌、副腎褐色細胞腫を遺伝的に発症する多発性内分泌腫瘍症(MEN)2A型、2B型、家族性甲状腺髄様癌及び大腸腸管神経節が欠損したために生じるヒルシュスプルング症(以下HSCR病)の原因遺伝子であることが明らかになっている。本研究ではHSCR病型変異を有するRET蛋白の不活化する機序を生化学的に解析した。RETにHSCR病に認められた10種類の変異(E762Q,S765P,S767P,R873Q,F893L,R897Q,E921K,R972G,P973L,M980T)を導入し、神経系細胞SK-N-MCに発現を試みた。10種類のうち9種類のHSCR病型変異に(E762Q,S765P,S767P,R873Q,F893L,R897Q,E921K,R972G,M980T)ついては、RET蛋白の良好な発現を得ることができ、コントロール(cーRET)の同程度であった。1種類(P973L)の変異を有するRET蛋白の発現はほとんど認められなかった。4種類(E762Q,S767P,R972G,M980T)の変異を有するRET蛋白はcーRET蛋白と較べてRETのチロシンリン酸化は1/2から1/3にまで減少した。また、SHC、PLC-γ及びPI-3K等のシグナル伝達機構も中等度障害されていることが明らかにされた。5種類(S765P,R873Q,F893L,R897Q,E921K)の変異を有するRET蛋白はGDNFによってまったく活性化されず、シグナル伝達機構も完全に障害されていた。この5種類の変異は完全なloss-of-function mutationであることが証明された。P973Lの変異を有するRET蛋白の減少は蛋白レベルの減少ではなく、mRNAレベルでの減少に原因があった。以上のことから、HSCR病の変異を有するRET蛋白の不活性化には、少なくとも3種類の機序があることが考えられた。

RET: GDNF GDNF (derived from neurotrophic factors), NTN, etc., are responsible for the development of multiple endocrine neoplasia (MEN)2A, 2B, Familial thyroid cancer and colorectal neurologic impairment are the causes of familial thyroid cancer (HSCR disease). In this study, we analyzed the mechanism of RET protein inactivation in HSCR disease types. 10 different kinds of RET HSCR (E762Q, S765P, S767P, R873Q, F893L, R897Q, E921K, R972G, P973L, M980T) were introduced into SK-N-MC cells. 9 HSCR types of 10 species (E762Q, S765P, S767P, R873Q, F893L, R897Q, E921K, R972G, M980T) are different. 1 species (P973L) is different from RET protein. 4 species (E762Q, S767P, R972G, M980T) have differences in RET protein c. RET protein c. The medium and high level of damage caused by the presence of a host of molecules such as SHC, PLC-γ and PI-3K 5 species (S765P, R873Q, F893L, R897Q, E921K) have different RET protein activity, and the RET protein activity is completely blocked. The five types of variation are completely loss-of-function mutation. P973L gene expression is different, RET protein expression is decreased, mRNA expression is decreased, and the reasons for this decrease are discussed. The mechanism of inactivation of RET protein in HSCR and HSCR is discussed.

项目成果

Toshihide Iwashita: "Biological and biochemical properties of Ret with kinase domain mutations identified in multiple endocrine neoplasia type 2B and familial medullary thyroid carcinoma."Oncogene. 18. 3919-3922 (1999)

Toshihide Iwashita：“在 2B 型多发性内分泌肿瘤和家族性甲状腺髓样癌中鉴定出具有激酶结构域突变的 Ret 的生物学和生化特性。”癌基因。

Yoshihiro Ishiguro: "The role of amino acids surrounding tyrosine 1062 in ret in specific binding of the shc phosphotyrosine-binding domain,"Endocrinology. 49. 1231-1237 (1999)

Yoshihiro Ishiguro：“ret 中酪氨酸 1062 周围的氨基酸在 shc 磷酸酪氨酸结合域的特异性结合中的作用”，内分泌学。

Toshihide Iwashita: "A Two-Hit model for development of multiple endocrine neoplasia type 2B by RET mutations."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 804-808 (2000)

Toshihide Iwashita：“通过 RET 突变发展 2B 型多发性内分泌肿瘤的二次打击模型。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 804-808 (2000)

Masashi Kato: "Ultraviolet light induces redox reaction-mediated dimerization and superactivation of oncogenic ret tyrosine kinases."Mol.Biol.Cell.. 11. 93-101 (2000)

Masashi Kato：“紫外线诱导氧化还原反应介导的致癌 ret 酪氨酸激酶的二聚化和超活化。”Mol.Biol.Cell.. 11. 93-101 (2000)

Seiko Nakayama: "Implication of expression of GDNF/Ret signalling components in differentiation of bone marrow haemopoietic sells."British J.Haematol.. 105. 50-57 (1999)

Seiko Nakayama：“GDNF/Ret 信号成分的表达对骨髓造血细胞分化的影响。”British J.Haematol.. 105. 50-57 (1999)