神経分化、再生におけるGDNF/Ret系の機能解析

GDNF/Ret系统在神经分化与再生中的功能分析

• 批准号: 11770116
• 负责人: 岩下 寿秀
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770116/
• 关键词: RETプロトオンコジーン; 多発性内分泌腫瘍症2型; GDNF; チロシンキナーゼ; ヒルシュスプルング病

RETプロトオンコジーン(以下RET)はGDNF(グリア細胞株由来神経栄養因子)、NTN等のGDNFファミリーをリガンドとする受容体型チロシンキナーゼをコードし、甲状腺髄様癌、副腎褐色細胞腫を遺伝的に発症する多発性内分泌腫瘍症(MEN)2A型、2B型、家族性甲状腺髄様癌及び大腸腸管神経節が欠損したために生じるヒルシュスプルング症(以下HSCR病)の原因遺伝子であることが明らかになっている。本研究ではHSCR病型変異を有するRET蛋白の不活化する機序を生化学的に解析した。RETにHSCR病に認められた10種類の変異(E762Q,S765P,S767P,R873Q,F893L,R897Q,E921K,R972G,P973L,M980T)を導入し、神経系細胞SK-N-MCに発現を試みた。10種類のうち9種類のHSCR病型変異に(E762Q,S765P,S767P,R873Q,F893L,R897Q,E921K,R972G,M980T)ついては、RET蛋白の良好な発現を得ることができ、コントロール(cーRET)の同程度であった。1種類(P973L)の変異を有するRET蛋白の発現はほとんど認められなかった。4種類(E762Q,S767P,R972G,M980T)の変異を有するRET蛋白はcーRET蛋白と較べてRETのチロシンリン酸化は1/2から1/3にまで減少した。また、SHC、PLC-γ及びPI-3K等のシグナル伝達機構も中等度障害されていることが明らかにされた。5種類(S765P,R873Q,F893L,R897Q,E921K)の変異を有するRET蛋白はGDNFによってまったく活性化されず、シグナル伝達機構も完全に障害されていた。この5種類の変異は完全なloss-of-function mutationであることが証明された。P973Lの変異を有するRET蛋白の減少は蛋白レベルの減少ではなく、mRNAレベルでの減少に原因があった。以上のことから、HSCR病の変異を有するRET蛋白の不活性化には、少なくとも3種類の機序があることが考えられた。

RET原子元（以下称为RET）编码受体型酪氨酸激酶配体，例如GDNF（GDIAL细胞系衍生的神经营养因子）和NTN，并且已证明是多种内分泌型（男性）2A型和2B型thy thy thy thy and typl and and typlary thy tylary thy tylary thy tylary thy tylary thy hydy andir and tylary thyy thy hydy andir and tyhy thy hydy andir and tyy and tylesial tyles and tyy and tyy thyy thyy thy y y。 Hirschsprung的疾病（以下称为HSCR疾病），这是由GDNF家族（神经胶质细胞系衍生的神经营养因子），GDNF家族和NTN引起的。在这项研究中，通过生化分析了具有HSCR型突变的RET蛋白失活的机制。在HSCR疾病（E762Q，S765P，S767P，R873Q，F873Q，R897Q，R897Q，E921K，R972G，P973L，M980T）中观察到了十个突变，并将其引入RET中，并在神经系统细胞SK-N-MC中尝试了表达。在10种类型的HSCR型突变（E762Q，S765P，S767P，R873Q，F893L，R897Q，R897Q，E921K，R972G，M980T）中，获得了RET蛋白的良好表达，并且获得了与对照（C-RET）相同的水平。具有一种类型（P973L）突变的RET蛋白很少表达。与C-RET蛋白相比，具有四个突变（E762Q，S767P，R972G，M980T）的RET蛋白的酪氨酸磷酸化从1/2降低到1/3。还已经表明，诸如SHC，PLC-γ和PI-3K之类的信号传导机制受到适度损害。携带五个突变（S765p，R873Q，F893L，R897Q，E921K）的RET蛋白根本没有被GDNF激活，并且信号转导机制完全受损。这五个突变已被证明是完全功能丧失的突变。携带p973l突变的RET蛋白的降低是由于mRNA水平降低而不是蛋白质水平的降低。从以上，人们认为至少存在三种不同的机制来使HSCR疾病突变的RET蛋白失活。

项目成果

Toshihide Iwashita: "Biological and biochemical properties of Ret with kinase domain mutations identified in multiple endocrine neoplasia type 2B and familial medullary thyroid carcinoma."Oncogene. 18. 3919-3922 (1999)

Toshihide Iwashita：“在 2B 型多发性内分泌肿瘤和家族性甲状腺髓样癌中鉴定出具有激酶结构域突变的 Ret 的生物学和生化特性。”癌基因。

Yoshihiro Ishiguro: "The role of amino acids surrounding tyrosine 1062 in ret in specific binding of the shc phosphotyrosine-binding domain,"Endocrinology. 49. 1231-1237 (1999)

Yoshihiro Ishiguro：“ret 中酪氨酸 1062 周围的氨基酸在 shc 磷酸酪氨酸结合域的特异性结合中的作用”，内分泌学。

Toshihide Iwashita: "A Two-Hit model for development of multiple endocrine neoplasia type 2B by RET mutations."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 804-808 (2000)

Toshihide Iwashita：“通过 RET 突变发展 2B 型多发性内分泌肿瘤的二次打击模型。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 804-808 (2000)

Masashi Kato: "Ultraviolet light induces redox reaction-mediated dimerization and superactivation of oncogenic ret tyrosine kinases."Mol.Biol.Cell.. 11. 93-101 (2000)

Masashi Kato：“紫外线诱导氧化还原反应介导的致癌 ret 酪氨酸激酶的二聚化和超活化。”Mol.Biol.Cell.. 11. 93-101 (2000)

Hideki Murakami: "Rho-dependent and-independent tyrosine phosphorylation of focal adhesion kinase,paxillin and p130Cas mediated by Ret kinase."Oncogene. 18. 1975-1982 (1999)

Hideki Murakami：“Ret 激酶介导的粘着斑激酶、桩蛋白和 p130Cas 的 Rho 依赖性和非依赖性酪氨酸磷酸化。”癌基因。