磁場配向二重膜を用いた生体膜中ペプチドの立体構造解析法の開発

开发使用磁定向双膜分析生物膜中肽的 3D 结构的方法

• 批准号: 10179217
• 负责人: 内藤 晶
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10179217/
• 关键词: イオンチャネルペプチド; 磁場配向二重膜; NMR; メリチン; ダイノルフィン; イオン選択性電極

本研究では両親媒性ペプチドであるメリチンおよびダイノルフィンがリン脂質二重膜に組み込まれることによって生じる磁場配向二重膜の性質についての基礎検討を行った。モル比で1:10に混合したメリチンあるいはダイノルフィンとリン脂質であるDMPCをメタノールに溶かし、有機溶媒を完全に除去した後、20mMのtris緩衝液で水和してペプチドを取り込んだ脂質二重膜を調製した。メリチン-DMPC二重膜について^<31>PNMRスペクトルを観測したところ、脂質二重膜の液晶ゲル相転移点(Tm)以上の温度で脂質二重膜の膜面が磁場に平行に配向することが判明した。同様の磁場配向現象はダイノルフィン-DMPC二重膜おいても観測された。この磁場配向二重膜の形態を決定するために、カリウムイオン選択性電極を用いて、膜中に取り込まれたK^+の漏洩を測定した。この結果、磁場配向二重膜ではK^+の漏洩が観測されたので、この膜は小胞体を形成していることが明らかになった。このような小胞体が磁場に対して自発的に配向するためには、小胞体全体で磁気異方性を持つ必要がある。従って、この小胞体は球形ではなくて楕円体を形成していると考えられる。そこで磁場配向二重膜において観測した^<31>PNMRの線形を解析した結果、この小胞体は長軸が短軸に比べて、少なくとも5倍以上長い形状をもつ細長い楕円体であることが明らかになった。この磁場配向二重膜に結合したメリチン分子も磁場配向していることが^<13>CNMRの結果から確かめられた。さらにメリチンはα-へリックスを形成しており、分子の中央部が膜中に挿入された状態で脂質膜表面に結合していることが判明した。これらの結果は一般の膜蛋白質やイオンチャネルペプチドの構造解析に磁場配向膜が有用であることを示唆している。

The purpose of this study is to improve the performance of the double membrane. In this study, the characteristics of the double membrane are studied in this study. in this study, the characteristics of the double membrane are studied. At 1:10, the mixture was used to mix the fat and the fat, the DMPC was used to dissolve the fat, the organic solvent was completely removed, the 20mM was used to tris the liquid water and the oil was used to extract the lipid double membrane. Temperature, lipid, liquid crystal, phase shift point (Tm), temperature, lipid, film surface, magnetic field, parallel direction, double film, liquid crystal, phase shift point (Tm), temperature, lipid, liquid crystal, phase shift point (Tm), temperature, lipid, film surface, magnetic field, parallel direction, temperature, lipid, liquid crystal, phase shift point (Tm), temperature, lipid, film surface, magnetic field, parallel direction, temperature, temperature, magnetic field, parallel direction. The same magnetic field is used to match the magnetic field in the same magnetic field. The double film of DMPC is in the same direction. The configuration of the magnetic field distribution of the double film determines the performance of the device, the selection of the active device, and the selection of the device in the film. The results show that the magnetic field is located in the double membrane K^ + leakage membrane, and the membrane small cell bodies are formed in the magnetic field. The magnetic field of the small cell, the magnetic field, the orientation of the small cell, the magnetic field of the small cell and the magnetic field of the small cell. The small cell body is spherical, the small cell body is spherical, and the small cell body is spherical. The distribution of the magnetic field to the double film is characterized by the analysis of the results of the analysis of the shape of the double film, the length of the small cell, the length of the cell, the length of the body, the shape of the body, the length of the body, the shape of the body, the shape of the body, the size of the body, the shape of the body, the length of the body, the shape of the body, the shape of the body, the shape The magnetic field distribution of the double film is combined with the molecular magnetic field of the magnetic field. The lt;13>CNMR results show that the magnetic field is correct. The formation of the membrane in the central part of the molecule and the appearance of the lipid membrane in the central part of the molecule were determined by combining the surface of the lipid membrane. The results show that the membrane protein is effective in the analysis of magnetic field alignment membrane.

项目成果

斉藤 肇: "膜蛋白質構造の固体高分解能NMRによる解析" Membrane. 23. 162-168 (1998)

Hajime Saito：“通过固态高分辨率 NMR 分析膜蛋白结构”膜。23. 162-168 (1998)