Cloning and production of human anti-B monoclonal antibody in ABO blood type

ABO血型人抗B单克隆抗体的克隆及生产

• 批准号: 10670403
• 负责人: OGAWA Motoki
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Yamagata University (1999-2001)Tokai University (1998)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10670403/
• 关键词: ABO histoblood group; natural antibody; human monoclonal antibody; ELISA; flow cytmetry; ABO式血液型; ヒト抗体; Bルンパ球; Bリンパ球

In our work, cloning of the variable region of human antibodies directed to B-antigen in ABO blood group, and production of the recombinant Fab fragment in Escherichia coli cells were carried out. After the culture of peripheral lymphocyte transformed by Epstein-Barr virus, specific antibody-producing cells were screened by ELISA and flowcytometry. After reverse transcription-PCR using subclass-specific primers, cDNA library was constructed and screened with a plasmid vector, pFab-His2, in the E. coli expression system. Two clones specifically reacted with B-antigen in ELISA and hemagglutination. Their nucleotide sequence of the heavy and light chains of the anti-B human antibodies was determined to be V_L1 and V_H4, respectively, in the immunoglobulin subgroup. The recombinant antibodies to the blood group antigen structure may be adaptable for phenotyping, which will provide a valuable means for forensic applications.

本研究对人源性抗ABO血型B抗原抗体可变区进行了克隆，并在大肠杆菌中进行了重组Fab片段的制备。经EB病毒转化的外周血淋巴细胞培养后，用ELISA和流式细胞仪筛选特异性抗体产生细胞。利用特异性引物进行逆转录PCR，构建cDNA文库，并以质粒载体pFab-His 2为载体，在大肠杆菌中进行筛选。coli表达系统。两个克隆在ELISA和血凝试验中与B抗原特异性反应。在免疫球蛋白亚群中，抗B人源抗体的重链和轻链的核苷酸序列分别确定为V_L1和V_H4。血型抗原结构的重组抗体可适用于表型分型，这将为法医应用提供有价值的手段。

项目成果

渡辺 剛太郎他: "APLP法による法医学的試料からのABO式血液型の遺伝子判定"日本法医学雑誌. 54. 227-232 (2000)

Gotaro Watanabe 等人：“使用 APLP 方法对法医样本中的 ABO 血型进行基因测定”《日本法医学杂志》54. 227-232 (2000)。

Hiroshi Takahashi, Iwao Aoyama, Kazuo Umetsu, Motoki Osawa: "Availability of TJA-II lectin as an anti-H agglutinin"Res. Pract. Forens. Med.. 44. 57-63 (2001)

Hiroshi Takahashi、Iwao Aoyama、Kazuo Umetsu、Motoki Osawa：“TJA-II 凝集素作为抗 H 凝集素的可用性”Res。

大澤 資樹: "フローサイトメトリーを利用した抗B抗体産生Bリンパ球の分離"日本法医学雑誌. 53・1. 101 (1999)

Mokiki Osawa：“使用流式细胞术分离产生抗 B 抗体的 B 淋巴细胞”日本法医学杂志 53, 1. 101 (1999)。

高橋 弘志他: "TJA-IIレクチンの抗H凝集素としての有用性について"法医学の実際と研究. 44. 57-63 (2001)

Hiroshi Takahashi 等人：“TJA-II 凝集素作为抗 H 凝集素的用途”《法医实践与研究》44. 57-63 (2001)。

Gotaro Watanabe, Kazuo Umetsu, Motoki Osawa: "Application of the PCR-APLP method to determine ABO genotypes in forensic samples"Jpn. J. Legal Med.. 54(2). 227-232 (2000)

Gotaro Watanabe、Kazuo Umetsu、Motoki Osawa：“应用 PCR-APLP 方法确定法医样本中的 ABO 基因型”Jpn。