動脈硬化症治療戦略として、HDL−C増加を標的とした非ウイルス遺伝子治療法の研究

针对HDL-C升高的非病毒基因治疗作为动脉硬化治疗策略的研究

• 批准号: 10670693
• 负责人: 岡部 真典
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10670693/
• 关键词: アンチセンス; 遺伝子導入; ウイルス遺伝子治療; コレステロールエステル転送蛋白; mRNA

【目的】LDL 受容体のリガンドであるアポ蛋白E合成ペプチド-N,N-dipalitylglycyl-apoE(dpGapoE)を用い、ヒトコレステロールエステル転送蛋白(hCETP)アンチセンスオリゴ(ODN)のhCETP発現細胞株への遺伝子導入法を検討した。【方法】hCETP遺伝子発現するChinese Hamster Ovary(CHO)細胞(hCETP-CHO)をFITC標識hCETPアンチセンスODN、及び合成dpGapoEペプチドと培養し、蛍光顕微鏡で経時的に観察した。CETPmRNA発現量はNorthern Biot法にて分析した。CETP特異活性測定には、discoidalbilayer particle(DBP)のコレステロールエステルをdonorとし、LDLはacceptorとし、経時的に検討した。【結果】培養24時間後、hCETPアンチセンスODNは細胞核内へ移行、集積した。細胞核内CETP mRNA発現量の減少は6〜24時間後に観察された。培養液中、CETP活性はhCETPアシチセンスODN導入後、12,18,24,36,48,72時間の長期に渡り活性減少が継続した。一方、hCETPセンスODN導入の場合、CETP mRNA発現量及びCETP活性は変化なかった。【総括】新しい合成ペプチトdpGapoEは効率的にhCETPアンチセンスODNをhCETP-CHO細胞株内へ導入し、CETPmRNA発現量を選択的に抑制することから、dpGapoEベクター使用することは、非ウイルス遺伝子治療の手段として、その有効性が示唆された。

[Objective] To investigate the expression of LDL receptor protein E in hCETP (ODN)-producing cell lines by gene transfer method using LDL receptor protein E (dpGapoE)-N,N-dipalitylglycyl-apoE(dpGapoE). [Methods] hCETP gene expression in Chinese Hamster Ovary(CHO) cells (hCETP-CHO), FITC labeling of hCETP gene ODN, and synthesis of dpGapoE were observed during culture and light microscopy. CETP mRNA expression was analyzed by Northern Biot method. CETP specific activity assay is a method for determining the activity of LDL receptor. [Results] After 24 hours of culture, hCETP was found to migrate and accumulate in the nucleus. The decrease of CETP mRNA expression in nucleus was observed 6 ~ 24 hours later. CETP activity in the culture medium decreased after 12, 18, 24, 36, 48, and 72 days after introduction of hCETP. In one case, the expression of CETP mRNA and the activity of CETP were changed when hCETP was introduced into ODN. [Summary] New synthetic protein dpGapoE gene efficiency, hCETP gene ODN, hCETP-CHO cell line introduction, CETP gene expression, and selective inhibition of dpGapoE gene expression.

项目成果

Saku K.,Takeda Y.,Jimi S.,Okabe M.,Shirai K.,Nii T.,Naito S.,Arakawa K.: "Long-term effect of low-denslty IIpoprotein apheresis in a pattent with heterozygous famillal hypercholesterolemia:flollow-up study using coronary anglography." J.Cardlology. 31. 23

Saku K.、Takeda Y.、Jimi S.、Okabe M.、Shirai K.、Nii T.、Naito S.、Arakawa K.：“低密度 IIpo 蛋白血浆分离术对杂合子家族性高胆固醇血症患者的长期影响

Jimi S.,Saku K.,Kusaba H.,Habe H.,Koga N.,Takebayashi S.: "Deposition of oxidized low-density lipoprotein and collagenosis occur coincldentally in human coronary stenosis:an immunohistochemical study of atherectomy." Coronary Artery Disease. 9. 551-557 (1

Jimi S.、Saku K.、Kusaba H.、Habe H.、Koga N.、Takebayashi S.：“氧化低密度脂蛋白沉积和胶原沉积同时发生在人类冠状动脉狭窄中：斑块切除术的免疫组织化学研究。”

Ohta T.,Nishiyama S.,Sakamura T.,Saku K.,Maung KK.,Matusda I: "Prodominance of large low density lipoprotein particles and lower fractional esterlfication rate of cholesterol in high density IIpoprotein in chikiren with insulin-dependent dlabetes mellitus

Ohta T.、Nishiyama S.、Sakamura T.、Saku K.、Maung KK.、Matusda I：“患有胰岛素依赖性糖尿病的 chikiren 中大的低密度脂蛋白颗粒的优势和高密度 IIpo 蛋白中胆固醇的较低酯化率

Ou J.Saku K.,Jimi S.,Ohta T.,Zhang B.,Pownall HJ.,Tsujita Y.,Arakawa K.: "Mechanism of action of probucol on cholesterol ester transfer protein (CETP)mRNA in a Chinese Hamster Ovary cell line that had been stably transfected with a human CETPgene." Biochi

Ou J.Saku K.、Jimi S.、Ohta T.、Zhang B.、Pownall HJ.、Tsujita Y.、Arakawa K.：“普罗布考对中国仓鼠胆固醇酯转移蛋白 (CETP) mRNA 的作用机制

Saku K.,Zhabg B.,Ohba T.,Shira K.,Tsuchiya Y.,Arakawa K.: "Levels of soluble cell adhesion molecules in patients with anglographically defined coronary atherosclerosis." Jon.Circu.J.63. 19-24 (1999)

Saku K.、Zhabg B.、Ohba T.、Shira K.、Tsuchiya Y.、Arakawa K.：“血管造影定义的冠状动脉粥样硬化患者中可溶性细胞粘附分子的水平。”