Charakterisierung Membran-bindender Domänen Actin-assoziierter Proteine

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Thema des Antrags ist die funktionelle Charakterisierung membranbindender Epitope von Cytoskelettproteinen mit dem Schwerpunkt ARPs (Actin related proteins). Es gibt Hinweise, daß bei Cytosevorgängen (phagocytic cups) und während des intrazellulären Vesikeltransports ARPs entweder direkt oder als Multiproteinkomplex mit der Plasma- oder Vesikelmembran assoziiert sind. Wie diese Bindung und über welche Bindungsdomänen sie erfolgt, ist bisher weder bekannt noch untersucht.Ziel ist es, ARP-Proteinkomplexe aus Thrombozyten zu isolieren und mit Hilfe einer von uns neu entwickelten, auf Fluoreszenz basierenden, hydrophoben Photomarkierungstechnik auf membranbindende Proteindomänen zu untersuchen.Membran-bindende Sequenzen sollen als Peptide synthetisiert oder als GST-Fusionsproteine in Bakterien exprimiert werden. Ihre Rekonstitution in Membranmodellen soll unter Anwendung hochauflösender, u.a. biophysikalischer Techniken (CD-Spektroskopie, isotherme Titrationskalorimetrie (ITC) und Photomarkierung qualitativ und quantitativ erfaßt und beschrieben werden.