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がん遺伝子の単離とヒトがんにおける異常の解明

癌症基因的分离和人类癌症异常的阐明

基本信息

批准号：
06283207
负责人：
渋谷正史
金额：
$ 119.04万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍血管形成や血管透過性亢進に関与すると考えられるVEGF(血管内皮増殖因子)およびその受容体(Flt-1,KDRキナーゼ)に関して分子生物学的、細胞生物学的解析を行い、本年度は以下の結果を得た。(1)VEGFの遺伝子発現誘導物質のひとつとして、フォルボールエステル(TPA)が知られているが、他の腫瘍プロモーターが同様の活性をもつかは明らかでない。そこでnon-TPAタイプの腫瘍プロモーターによるVEGFの遺伝子発現調節作用を調べ、プロテインフォスファターゼ阻害剤Okadaic acidがVEGF mRNAレベルの上昇を引き起こすことをはじめて見出した。この作用はOkadaic acidのもつ2つの活性、プロテインフォスファターゼ1および2Aの阻害活性のうち後者に良い相関が見られたPKC阻害剤、TNF-alpha中和抗体で抑制できなかったことから、TPAとは異なるシグナル伝達によるものと考えられた。(2)受容体KDRのシグナル伝達を初代培養血管内皮細胞およびKDR発現NIH3T3細胞をもちいて詳しく解析した。KDRはPDGF受容体と構造類似性を示すが、キナーゼ挿入配列の自己リン酸化モチーフが異なりシグナル伝達にかなりの違いが予想されていた。事実、Rasの活性化はほとんど認められず、PLC-gammaからPKCの活性化、Raf-MEK-MAPキナーゼの活性化が主なDNA合成経路であった。すなわち、ドミナントネガティブRasではVEGFによるDNA合成は抑制できず、PKC阻害剤で有効に抑制できた。これにより内皮細胞増殖の特徴のひとつが明らかとなった。

The following results were obtained in this year's study on the relationship between tumor angiogenesis and vascular permeability and vascular endothelial growth factor (VEGF) and receptor (Flt-1,KDR). (1)VEGF gene expression induction substances, such as TPA, TPA The expression of VEGF mRNA is regulated by the non-TPA gene, which inhibits the expression of VEGF mRNA. This action is related to the activity of Okadaic acid 2, the inhibition activity of PKC inhibitor, TNF-alpha neutralizing antibody, and the inhibition activity of TPA. (2)The receptor KDR was isolated from primary cultured vascular endothelial cells and KDR was isolated from NIH 3T3 cells. KDR has shown that PDGF receptors and structures are similar, and that they are different from each other. Ras activation, PKC activation, Raf-MEK-MAP activation and DNA synthesis pathway DNA synthesis is inhibited by VEGF and PKC inhibitors are inhibited by PKC inhibitors. The characteristics of endothelial cell proliferation are discussed in detail.