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細胞表層での分子認識の動力学的解析

细胞表面分子识别动态分析

基本信息

批准号：
10875196
负责人：
砂本順三
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、砂本自身が確立した膜タンパク質のリポソーム抽出方を展開して、膜タンパク質研究のための基礎支援システムを開発しようとするものである。本研究ではまずE-cadherinをモデルとして選び、これをその活性を保持したままリポソームに抽出する方法を確立した。次に既に確立したリポソームの気液界面への展開を行い、気液界面におけるE-cadherinの活性をリポソームに抽出したE-cadherinとの相互作用を解析することで本研究の目的は達成される。F9細胞からリポソーム膜へ抽出したE-cadherinの活性発現は次のように確認した。1)トリプシン処理を施すことにより抽出したE-cadherinの活性部位を欠失させたプロテオリポソーム、2)活性部位に結合する抗体で処理することによりマスキングを施したブロテオリポソーム、また3)元来E-cadherinを持たないJurkat細胞より膜タンパク質を抽出したリポソームの三種はいづれもF9の接着形成を阻害しなかったが、E-cadherinを抽出したプロテオリポソームはF9の接着形成を阻害することが確認された。よってリポソームに抽出後もE-cadherinの結合活性は失われていないことが示された。この抽出E-cadherinが膜の大規模なモルホロジー変化を経ても尚、活性を保持し続けるかどうかを、リポソームから非接着培養系細胞JurkatにE-cadherinを転送してから接着活性を評価することで検証した。Cholesteryl OleateやDLPCで前処理をおこなったproteoliposomeを作用させたJurkat細胞は、E-cadherinのリポソームから細胞膜への転送が確認されたばかりでなく、細胞間の接着形成が観測された。よって活性を保持した状態でのE-cadherinのJurkat細胞への導入が示された。以上より本方法によりE-cadherinは活性を保持したまま細胞膜とリポソームの間を可逆に転送できることが示され、研究目的の大部分が達成されたと言える。

The purpose of this study and the established method of extracting and unfolding the film's qualityて、Membrane material research and development foundation support のである. In this study, the E-cadherin extraction method was established, and the activity and activity of the E-cadherin were maintained. The activity of E-cadherin at the liquid interface and the development of the liquid interface have been established.をリポソームにExtraction of E-cadherin and interaction analysis of することでThe purpose of this study was achieved. The activity of E-cadherin in F9 cells has been confirmed after extraction from the membrane. 2 ) active site binding antibody treatment treatment 3) Genlai E-cadh erin たないJurkat cell よりmembrane タンパクquality をdraw out したリポソームのthree kinds of はいづれもF9のthen form を hindranceしなかったが, E-cadherinをdraw out したプロテオリポソームはF9の and then form をblocking することがconfirmation された. After extracting the よってリポソームに, the binding activity of E-cadherin is lost and the われていないことがshows された.このExtract E-cadherin が film の large-scale なモルホロジー変化を経ても上、Activity をKEEP し続けるかどうかを、リポソームからNon-adhesive cultured cells JurkatにE-cadherinを転 Sent してからAdhesion activity をassessment価することで検证した. Cholesteryl OleateやDLPCでpretreatmentをおこなったproteoliposomeをactionさせたJurkat cellsは、E -Cadherin のリポソームからCell membrane への転 Send がConfirmation されたばかりでなく、The formation of が観measurement された between cells. The active state of E-cadherin is maintained in Jurkat cells and the expression of E-cadherin is introduced into Jurkat cells. The above method is used to maintain the activity of E-cadherin and maintain the cell membrane. The purpose of the research has been achieved in a reversible way. Most of the research objectives have been achieved.