ヘミデスモソームの膜タンパク質BP180の分子病因学的研究

本研究は細胞・基質間接着装置へミデスモソームに存在する膜タンパク質BP180分子の切断断片の生化学的、免疫化学的性質を調べ、線状IgA水庖症の主要抗原との関係を明らかにすること、さらにBP180の切断と抗原性の関係を解析することを目的に行った。具体的には次のような成果を得た。1 培養角質細胞では一部のBP180分子は細胞膜近くで切断され、分子の細胞外部分が120kDの断片として培養液中に放出されてくるので、この培養上清画分からモノローナル抗体を用いたアフィニティー力ラム法で120kDのBP180分子の細胞外断片を精製した。2 120kD断片は条件により、100kD断片となるのでBP180の異なる部位に対するエピトープをもつ数種類のモノクローナル抗体を用いて、120kDと100kD断片の関係を解析し、100kD断片は120kD断片のC端側が切断されて生じることを明らかにした。3 120kDと100kD断片をそれぞれ精製し、低角度回転蒸着法で両分子の形態を直接観察し、その解析から生化学的結果と一致することを確認した。4 単離した120kDおよび100kD断片と線状IgA水疱症患者血清の反応性を免疫ブロット法で調べた結果、これらの断片は線状IgA水疱症の抗原であると同定した。5 線状IgA水疱症患者血清中の自己抗体と類似の性質を示すモノクローナル抗体の作製に成功した。この抗体は120kDおよび100kD断片とのみ反応し、BP180分子とは反応しなかった。このことから、BP180分子の切断により、新たな抗原性が出現することが明らかになった。

本研究は細胞・基質間接着装置へミデスモソームに存在する膜タンパク質BP180分子の切断断片の生化学的、免疫化学的性質を調べ、線状IgA水庖症の主要抗原との関係を明らかにすること、さらにBP180の切断と抗原性の関係を解析することを目的に行った。具体的には次のような成果を得た。1 培養角質細胞では一部のBP180分子は細胞膜近くで切断され、分子の細胞外部分が120kDの断片として培養液中に放出されてくるので、この培養上清画分からモノローナル抗体を用いたアフィニティー力ラム法で120kDのBP180分子の細胞外断片を精製した。2 120kD断片は条件により、100kD断片となるのでBP180の異なる部位に対するエピトープをもつ数種類のモノクローナル抗体を用いて、120kDと100kD断片の関係を解析し、100kD断片は120kD断片のC端側が切断されて生じることを明らかにした。3 120kDと100kD断片をそれぞれ精製し、低角度回転蒸着法で両分子の形態を直接観察し、その解析から生化学的結果と一致することを確認した。4 単離した120kDおよび100kD断片と線状IgA水疱症患者血清の反応性を免疫ブロット法で調べた結果、これらの断片は線状IgA水疱症の抗原であると同定した。5 線状IgA水疱症患者血清中の自己抗体と類似の性質を示すモノクローナル抗体の作製に成功した。この抗体は120kDおよび100kD断片とのみ反応し、BP180分子とは反応しなかった。このことから、BP180分子の切断により、新たな抗原性が出現することが明らかになった。