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ヘミデスモソームの膜タンパク質BP180の分子病因学的研究

半桥粒膜蛋白BP180的分子发病机制研究

基本信息

批准号：
10877135
负责人：
尾張部克志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877135/
关键词：
ヘミデスモソーム類天疱瘡抗原細胞接着

项目摘要

本研究は細胞・基質間接着装置へミデスモソームに存在する膜タンパク質BP180分子の切断断片の生化学的、免疫化学的性質を調べ、線状IgA水庖症の主要抗原との関係を明らかにすること、さらにBP180の切断と抗原性の関係を解析することを目的に行った。具体的には次のような成果を得た。1 培養角質細胞では一部のBP180分子は細胞膜近くで切断され、分子の細胞外部分が120kDの断片として培養液中に放出されてくるので、この培養上清画分からモノローナル抗体を用いたアフィニティー力ラム法で120kDのBP180分子の細胞外断片を精製した。2 120kD断片は条件により、100kD断片となるのでBP180の異なる部位に対するエピトープをもつ数種類のモノクローナル抗体を用いて、120kDと100kD断片の関係を解析し、100kD断片は120kD断片のC端側が切断されて生じることを明らかにした。3 120kDと100kD断片をそれぞれ精製し、低角度回転蒸着法で両分子の形態を直接観察し、その解析から生化学的結果と一致することを確認した。4 単離した120kDおよび100kD断片と線状IgA水疱症患者血清の反応性を免疫ブロット法で調べた結果、これらの断片は線状IgA水疱症の抗原であると同定した。5 線状IgA水疱症患者血清中の自己抗体と類似の性質を示すモノクローナル抗体の作製に成功した。この抗体は120kDおよび100kD断片とのみ反応し、BP180分子とは反応しなかった。このことから、BP180分子の切断により、新たな抗原性が出現することが明らかになった。

This study aims to clarify the biochemical and immunochemical properties of the fragment of the membrane protein BP180 present in the cell-matrix interface, and to elucidate the relationship between the antigenic properties of the fragment of BP180 and the major antigens of linear IgA. Specific results were obtained. 1. In cultured keratinocytes, a part of BP180 molecule was cut off near the cell membrane, and the extracellular fragment of 120kD molecule was released into the culture medium. The supernatant of the culture medium was separated and purified. The extracellular fragment of 120kD BP180 molecule was purified by the middle reaction method. 2 120kD fragment conditions, 100kD fragment and BP180 different parts of the corresponding number of types of antibodies, 120kD fragment and 100kD fragment relationship analysis, 100 kD fragment and 120kD fragment C terminal side cut off from the production of the same. 3.120 kD and 100kD fragments were refined, the molecular morphology was observed directly by low angle evaporation, and the biochemical results were confirmed. 4. Antigenicity of serum from patients with linear IgA blistering due to 120 kD fragments and 100kD fragments. Similar properties of antibodies in sera from patients with linear IgA blistering indicate successful production of antibodies. The antibody is 120kD and 100kD, and the BP180 molecule is 180 kD. This is the first time that the BP180 molecule has been cut off, and the new antigenicity has appeared.