新しい水疱性類天疱瘡抗原の分子構造

一种新的大疱性类天疱疮抗原的分子结构

• 批准号: 04670643
• 负责人: 藤原 作平
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670643/
• 关键词: 水疱性類天疱瘡抗原; 一次構造; 分子生物学; DNA配列

水疱性類天疱瘡は、表皮基底膜成分に対する自己抗体が血清中に出現する水疱性疾患であるが、近年そのうちの二種の抗原の構造があきらかにされた。いっぽう我々は水疱性類天疱瘡のある患者血清中には、これらとは異なる450kD抗原を認識する抗体が存在することを発見したが(J.Dermatol.1992)、その分子の構造は明らかでない。今回我々は分子生物学的手法を用いてこの抗原決定基の分子構造を解明したので、報告する。まず450kD抗原を認識する患者血清を用いて、ヒト表皮細胞由来のcDNAライブラリー約200万個をスクリーニングし、この抗原をコードするクローンを1個単離した。この単離クローンが実際この抗原をコードすることは以下の3通りの証拠、即ち(1)単離クローンを大腸菌Y1089に感染させて発現させた融合蛋白質に患者血清がイムのブロットで反応したこと、(2)融合蛋白質に吸着される患者血清成分が450kD抗原と反応したこと。(3)融合蛋白質を家兎に免疫して作製したポリクローナル抗体が450kD抗原と反応したことで確認した。単離クローンの挿入部位を^<32>Pで標識し、この抗原を発現するHO-1-u-1(ヒト口腔底発生扁平上皮癌由来)細胞のmRNAを用いてノーザンハイ ブリダイゼイションを実施したところ、約12‐14KbpのmRNAとハイブリダイズした。挿入部位は276bpのopen reading frameを有し、推定のアミノ酸配列からは現在まで報告のある物質とのホモロジーは認められず新物質と同定された。

Vesicular pemphigoid, epidermal basement membrane components, antibodies to the two antigens present in the serum, vesicular disease, and recent years. The presence of antibodies to 450kD antigens in the sera of patients with vesicular pemphigoid was detected (J. Dermatol. 1992), and the molecular structure of these antibodies was revealed. In this paper, the molecular structure of antigenic determinants is elucidated by molecular biological methods. The 450kD antigen is recognized in the serum of patients, and approximately 2 million cDNA fragments derived from epidermal cells are identified. The following three pathways were identified: (1) isolation of E. coli Y1089, detection of E. coli Y108 (3)The fusion protein was identified as a 450kD antigen. The <32>mRNA of HO-1-u-1 cells (the origin of squamous cell carcinoma of the oral floor) was used to identify the entry site of the isolated tumor and to express the antigen. The mRNA of HO-1-u-1 cells was used to identify the entry site of tumor and to express the antigen. The mRNA of HO-1-u-1 cells was about 12 - 14Kbp in length. The 276bp open reading frame of the insertion site contains a putative acid sequence that is currently reported as a new substance and identified as a new substance.

项目成果

Fujiwara S.: "A case of sudepidermal blister disease associated with autoantibody against 450 KD protein." J.Dermatology. 19. 610-613 (1992)

Fujiwara S.：“一例与 450 KD 蛋白自身抗体相关的皮下水疱病。”