遺伝子導入による異種間臓器移植モデルの作製

通过基因转移创建跨物种器官移植模型

• 批准号: 10877188
• 负责人: 石坂 重昭
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877188/
• 关键词: マンソン住血吸虫; イヌ糸状虫; 遺伝子導入; 免疫抑制遺伝子; Ras遺伝子; 異種間臓器移植

本研究は宿主免疫系から回避して寄生する寄生虫、マンソン住血吸虫Schistosoma mansoniとイヌ糸状虫Dirofilaria immitisは、宿主内での免疫系から身を守るために虫体表皮成分または分泌物中に特殊なタンパクを所有していると推測されるが、まだこのようなタンパクが見つかったという報告はない。そこでこのような免疫抑制に関わるタンパクをコードするcDNAを検索し、これをmammalianで高発現するベクターを用いて遺伝子導入し、overexpressionさせることにより、宿主免疫系でどのような機構で免疫抑制反応が行われているのか検討することにした。マンソン住血吸虫(Schistosoma mansoni)及びイヌ糸状虫(Dirofilaria immitis)の虫体からRNAを抽出しmRNAを精製後、cDNAライブラリーを構築した。このphageを大腸菌に感染させ、抗S.mansoni抗体及び抗D.immitis抗体を用いてスクリーニングし、寄生虫由来タンパクをコードするcDNAを含むcloneを取得した。このうちS.mansoniより得られたcDNAはそのシークエンスが免疫抑制遺伝子と推定されているRas遺伝子とホモロジーを有していた。次にこのRas遺伝子(以下SmRasと呼ぶ)をクローニングし、種の違う2種類のcell line、マウスのファイブロブラスト(NIH3T3)及びヒト正常血管内皮細(HUVEC)に遺伝子導入することを試みた。まず、mammalian発現ベクターであるpCDNA3.1にSmRas遺伝子をサブクローニングし、これをNIH3T3及びHUVECにトランスフェクトし、薬剤耐性株のみクローニングし、数種類のクローンを得た。これらを異種のリンパ球(NIH3T3とヒト抹消血リンパ球またはHUVECとマウス脾細胞)と共培養することにより、宿主免疫反応をMLR(Mixed Lymphocytes Reaction)にて評価した。その結果、遺伝子導入していないcell lineとSmRasを過剰発現するcell lineとの間に有意な差は見出されなかった。この結果よりまだ他に免疫抑制に関与するたくさんのファクターがあるものと考えられ、これからさらにそのファクターを同様な方法で検索する予定である。

In this study, the host immune system was used to avoid parasites and to control Schistosoma mansoni and Dirofilaria immitis. The host immune system was used to control the host immune system. The epidermal components of Schistosoma japonicum were found in the secretions of Schistosoma japonicum. The expression of cDNA in the immune system is related to immune suppression, and the expression of cDNA in the immune system is related to immune suppression. The RNA of Schistosoma mansoni and Dirofilaria immitis was extracted and purified, and the cDNA was constructed. The phage-related E. coli infection, anti-S.mansoni antibodies and anti-D.immitis antibodies were obtained using cDNA from the parasite origin. The cDNA sequence of Ras mansoni was derived from the cDNA sequence of Ras mansoni and the cDNA sequence of Ras mansoni. Next, Ras gene (SmRas) was introduced into two kinds of cell lines, NIH 3T3 and HUVEC. In addition to pCDNA3.1, SmRas gene was detected by NIH 3T3 and HUVEC, resistant strains were detected by pCDNA3.1 and several species were detected by pCDNA3.1. The host immune response (MLR) was evaluated by NIH 3T3 and HUVEC. As a result, the cell line and SmRas are introduced into the cell, and the intentional difference between the cell line and SmRas is detected. The results of this study were similar to those of the previous study.