胚性幹細胞(ES細胞)を用いた硝子軟骨形成の誘導

使用胚胎干细胞（ES 细胞）诱导透明软骨形成

• 批准号: 14657365
• 负责人: 高田 晃平
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Shimane University (2004)Shimane Medical University (2002-2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657365/
• 关键词: 胚性幹細胞; ES細胞; 軟骨; feeder細胞; 細胞培養; FGF; TGF-β

mouse ES細胞を1x10^6 cells/dishとなるようにfeeder細胞上に播種し、ES細胞を増殖させ、bFGF, TGF-βを様々な濃度と組み合わせで投与した。軟骨細胞への誘導を組織学的・組織免疫学的にtype II collagenとs100蛋白を指標として検索したところ、極一部に軟骨細胞様の所見を呈する細胞群を見つけた。しかし、将来の再生医学への応用を考えれば、十分な軟骨組織は誘導できていないと結論した。サイトカインの競合作用や相乗効果を詳細に検証するために、繰り返し試験が容易なmRNAでの検索、つまりRT-PCR(type II collagen, aggrecan)を主な方法とした。bFGF, TGF-βの組み合わせに追加して、BMP2の効果についても検討した。特定の組み合わせてある程度の相乗効果を発揮させることはできた。しかし、その効果はやはり僅かであったり一時的であったため、この細胞培養系つまりfeeder細胞上に播種する方法では有用な軟骨組織培養は導けないと結論した。そこで、mouse ES細胞をSCIDマウスの生体内に移植し、in vivoでの組織誘導を試みた。その結果、関節内にときおり成熟した軟骨組織が形成されていることがわかった。つまり、safranin-Oではっきり染色される組織が観察できた。これはfeeder細胞上でのin vitro培養系では決して形成されないレベルまで成熟した組織であった。しかし、このような組織が形成される確率は低かった。組織形成のばらつきは局所の環境に影響を受けていることはあきらかであった。現在は、その要因を検索するために、軟骨・骨形成に関与するとされているBMP/ Noggin/ Chordin/ cbfa-1/ CDMP-1/ GDF-5などについて検索している。今後はこれまでの知見を生かして、生体内で偶発的に形成される要因を同定したい。そのためにはさらに生体内での研究を推進し、可能性のある要因をin vitroで再現する実験系を確立し軟骨再生の実現を目指したい。

Mouse ES cells を 1 x10 ^ 6 cells/dish と な る よ う に に on feeder cells seeding し, ES cells を raised colonization さ せ, bFGF, TGF - beta を others 々 な concentration と group み close わ せ で cast with し た. Chondrocytes へ の induced を histology, the organization, the immunological に type II collagen と according to protein を index と し て 検 cable し た と こ ろ, extremely a に chondrocytes others を is の see す る cells を see つ け た. し か し, future の regenerative medicine へ の 応 tested え in を れ ば, very な cartilage induced で は き て い な い と conclusion し た. サ イ ト カ イ ン の competition role や 乗 unseen fruit を detailed に 検 card す る た め に, Qiao り return し test が easy な mRNA で の 検 rope, つ ま り rt-pcr (type II collagen, aggrecan) を principal な method と し た. The bFGF, TGF-β group み combined with わせに, and the addition of <s:1> て and BMP2 has the effect of に, た, て, 検 and た. A specific group み is in line with the わせてある degree of <s:1> and the 乗 effect occurs を, させる と, と, で, た, た. し か し, そ の unseen fruit は や は り only か で あ っ た り transient で あ っ た た め, こ の cell culture system つ ま り に on feeder cells seeded す る method で は useful な cartilage tissue culture は guide け な い と conclusion し た. Youdaoplaceholder0 で で, mouse ES cells をSCID ウス ウス <s:1> in vivo に transplantation <s:1>, in vivoで <s:1> tissue induction を test みた. そ の results, masato section に と き お り mature し た cartilage が form さ れ て い る こ と が わ か っ た. Youdaoplaceholder0 ま ま, safranin-Oで っ っ っ が観 される staining される tissue が観 examination で で た た. こ れ は feeder cells で の the in vitro culture system で は definitely し て form さ れ な い レ ベ ル ま で mature し た organization で あ っ た. The <s:1> った and <s:1> ような organize が to form される with a low <e:1> った accuracy rate. Organization form の ば ら つ き は bureau の environment に を by け て い る こ と は あ き ら か で あ っ た. Now は, そ の by を 検 cable す る た め に, cartilage, bone formation に masato and す る と さ れ て い る BMP/Noggin/Chordin / / make CDMP cbfa - 1-1 / GDF - 5 な ど に つ い て 検 cable し て い る. In the future, it will be known that を を <s:1> て て and で occasionally occurring に in the body, the main cause of される formation される is を, which is also determined to be た れまで. そ の た め に は さ ら に born in vivo で の を promote し, feasibility study の あ る by を in vitro で reappearance す る be を 験 department establish し cartilage regeneration の be presently を refers し た い.