上皮・間葉相互作用-特に歯胚分化-に関与するBMP-3の作用について

BMP-3 参与上皮间质相互作用，特别是牙胚分化的作用

• 批准号: 10877292
• 负责人: 永井 教之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877292/
• 关键词: 歯胚; BMP-3; mRNA; 歯乳頭細胞; 上皮間葉相互作用

今回,BMP-3のmRNΔのプローブを作製し,歯胚の発生過程におけるその発現をin situ hybridization法により顧察した。[歯胚切片の作製]ICR系マウス胎生13〜18日の頭部を4%パラホルムアルデヒド溶液で固定後,パラフィン包埋した。下顎第一大臼歯歯胚の中央部を前頭断にて薄切し,厚さ4μmの切片を作製した。[マウスBMP-3cDNA断片のクローニング]マウスBMP-3の塩基配列は報告がないため,ラットBMP-3の塩基配列からプライマーを設定した。これを用い,ICR系マウスの肺から抽出したtotal RNAからPCR法にて増幅した後,増幅産物をベクターに組み込みクローニングした。クローニングしたcDNA断片の塩基配列をデオキシ法で調べたところ,ヒトおよびラットBMP-3 mRNAの塩基配列とのホモロジーがそれぞれ86.4%,92.0%であった。このことから,この断片がマウスBMP-3をコードするものであることが確認された。[プローブ作製とin situ hybridization]クローニングしたマウスBMP-3 cDNA断片を鋳型としてin vitro transcriptionを行い,ジゴキシゲニン標識RNAプローブを作製.した。切片とハイブリダイズ後,Dig Nucleic Acid Detection Kit(Boehringer Mannheim)により,抗原抗体反応を行い,光顕的に観察した。[結果と考察]胎生14日になってエナメル結節に面する歯乳頭細胞にBMP-3の非常に弱いシグナルが認められたが,胎生15日以後はシグナルを確認できなかった。胎生14日の,BMP-3の発現パターンから,この時期の上皮間葉相互作用によるエナメル上皮細胞あるいは歯乳頭細胞の分化にBMP-3が関与している可能性が孝えられる。BMP-3は軟骨膜や骨芽細胞で発現されることが明らかとなっているが,本研究では歯胚周囲の軟骨膜や骨芽細胞に明らかなシグナルを確認できなかったとともに,歯胚で確認されたシグナルも非常に弱いものであった。このことから,今回の方法ではBMP-3の発現の検出は限界があり,凍結切片の使用や放射性プローブを用いたin situ hybridizationを行う必要性があると考えられる。

In this paper,BMP-3 mRNΔ expression is controlled, and the development of dental embryos is observed in situ hybridization method. [Preparation of dental embryo sections]ICR system The head of the fetus on the 13th to 18th day of birth is fixed in 4% of the solution, and then embedded in the solution. The first mandibular molar embryo was cut thinly at the front and 4μm thick. [BMP-3 cDNA Fragment] BMP-3 cDNA Fragment Configuration Report In this case, the ICR method is used to extract total RNA, and the amplification product is used to extract total RNA. The gene base alignment of cDNA fragments was 86.4% and 92.0% respectively. This is the first time I've ever seen one of these. The BMP-3 cDNA fragment was typed in vitro transcription, and the RNA fragment was prepared.した。Dig Nucleic Acid Detection Kit(Boehringer Mannheim) is available for detection of antigen-antibody antibodies. [Results] BMP-3 was very weak in papilla cells on the 14th day of birth, and was confirmed after the 15th day of birth. At the 14th day of birth,BMP-3 expression is related to epithelial cell differentiation, and the possibility of BMP-3 expression in epithelial cell differentiation and papillary cell differentiation at this stage is also discussed. BMP-3 was found in the cartilage and bone bud cells. In this study, BMP-3 was found in the cartilage and bone bud cells. The method of this paper is to detect the limit of BMP-3 discovery, and to use frozen sections to detect the necessity of using radioactive materials in situ hybridization.