神経細胞の核内転写因子の人工制御による脳機構の解明

通过人工控制神经元核转录因子阐明大脑机制

• 批准号: 10878149
• 负责人: 遠山 育夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878149/
• 关键词: FGF; アンチセンス; 一酸化窒素; ペプチド核酸; トランスフェクション; 神経細胞死; 転写因子; 核移行シグナル; mRNA; 脳機能解析法; 一酸化窒素合成酵素

本研究の目的は、FGFのN端に存在する核移行ペプチドを利用して、哺乳動物の細胞核内にペプチドやオリゴヌクレオチドを送り込む方法を開発し、特定の遺伝子の核内転写因子の人工制御することにより、脳機能を解析することである。3年間の研究により、次の成果をあげた。1)FGF-1のN端に存在する核移行ペプチドに、蛍光物質ペプチド(GFP)や自然界に存在しないと推測される取りペプチドマーカーTyr-D-A1a-Pheを結合させたいわゆる核内運び野ペプチドを作成した。2)この運び野ペプチドを哺乳動物の培養細胞(CHO細胞)に投与することにより、マーカーペプチドが核内に侵入することを確認した。3)この運び野ペプチドとアンチセンスプローブとの複合体をラットに投与するIn Vivo実験を行った。Targetとしては、我々が解析方法に熟知しているグルタメートのトランスポーターとiNOS遺伝子を選んだ。核移行ペプチドとアンチセンスプローブ(PNA)との複合体をラットの脳室内に投与し、グルタメートのトランスポーターとiNOS遺伝子の発現抑制効果を検討したが、今のところ期待されたような結果を観察することができなかった。以上のように、核内にペプチドやアンチセンスプローブを送り込む運び野ペプチドの作成することができた。少なくとも培養細胞では一定の成果を上げることができた。投与濃度、投与方法などの最適条件が決定されれば、in vivoへの投与も可能となり、新しい研究手法を切り開くものと期待される。なお、成果の一部を論文発表した。

Purpose の this study は, FGF の n-terminal に exist す る nuclear migration ペ プ チ ド を using し て, mammals の nuclei に ペ プ チ ド や オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を send り 込 む method を open 発 し, specific の but 伝 の planning to write within the nuclear factor の artificial suppression す る こ と に よ り, 脳 functional を parsing す る こ と で あ る. Over the past three years, <s:1> research has been conducted on によ によ, and the secondary <s:1> achievements are をあげた. 1) の FGF - 1 N end に す る nuclear migration ペ プ チ ド に 蛍 light material ペ プ チ ド (GFP) や に nature exist し な い と speculation さ れ る take り ペ プ チ ド マ ー カ ー Tyr - D - A1a - Phe を combining さ せ た い わ ゆ る nuclear transport び wild ペ プ チ ド を made し た. 2) こ の luck び wild ペ プ チ ド を mammals の cultured cells (CHO cells) cast with に す る こ と に よ り, マ ー カ ー ペ プ チ ド が intranuclear に intrusion す る こ と を confirm し た. 3) こ の luck び wild ペ プ チ ド と ア ン チ セ ン ス プ ロ ー ブ と の complex を ラ ッ ト に cast with す る In Vivo be 験 を line っ た. Target と し て は, I 々 が parsing methods known to に し て い る グ ル タ メ ー ト の ト ラ ン ス ポ ー タ ー と traces of iNOS 伝 を son choose ん だ. Nuclear migration ペ プ チ ド と ア ン チ セ ン ス プ ロ ー ブ (PNA) と の complex を ラ ッ ト の 脳 cast and し, indoor に グ ル タ メ ー ト の ト ラ ン ス ポ ー タ ー と iNOS posthumous son 伝 の 発 inhibition of unseen fruit を now beg し 検 た が, today の と こ ろ expect さ れ た よ う な results を 観 examine す る こ と が で き な か っ た. Within the above の よ う に, nuclear に ペ プ チ ド や ア ン チ セ ン ス プ ロ ー ブ を send り 込 む luck び wild ペ プ チ ド の made す る こ と が で き た. The number of なくと なくと cultured cells で で is certain that the <s:1> results を will be published げる た とがで た た た. With concentration, shots and methods な ど の optimal condition が decided さ れ れ ば, the in vivo へ の cast and も might と な り, new し い research technique を り cutting open く も の と expect さ れ る. Youdaoplaceholder0, achievements: a を paper published: た.

项目成果

Kitano H: "Expression of inducible nitric oxide synthase in human thyroid papillary carcinoma."Thyroid. 9. 113-117 (1999)

Kitano H：“诱导型一氧化氮合酶在人甲状腺乳头状癌中的表达。”甲状腺。

Kitamura Y,Ota T, et al.: "Hydrogen peroxide-induced apoptosis mediated by p53 protein in glial cells"Glia. 25. 154-164 (1999)

Kitamura Y、Ota T 等人：“神经胶质细胞中 p53 蛋白介导的过氧化氢诱导的细胞凋亡”Glia。

Kitano H,Kitanishi T, et al.: "Expression of inducible nitric oxide synthase in human thyroid papillary carcinomas"Thyroid. 9. 113-117 (1999)

Kitano H、Kitanishi T 等人：“诱导型一氧化氮合酶在人甲状腺乳头状癌中的表达”甲状腺。

Y.Kitamura et. al: "In Vitro and In Vivo Induction of Heme Oxygenase-1 in Rat Glial Cells:" GLIA. 22. 138-148 (1998)

Y.Kitamura 等。

Kitamura Y: "Hydrogen peroxide-induced apoptosis mediated by p53 protein in glial cells."Glia. 25. 154-164 (1999)

Kitamura Y：“神经胶质细胞中 p53 蛋白介导的过氧化氢诱导的细胞凋亡。”神经胶质细胞。