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重金属吸着ドメインの真核微生物細胞表層へのターゲッティング

将重金属吸附域靶向真核微生物细胞表面层

基本信息

批准号：
11132210
负责人：
北本勝ひこ
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

重金属を吸着するバイオソルベントとして環境浄化に利用できる微生物を開発するため、重金属結合ドメインを細胞表層に発現する糸状菌の分子育種の基本的技術を確立することを目的とする。糸状菌の中で最も遺伝学的な解析が進んでいるAspergillus nidulansおよび産業的に重要な麹菌Aspergillus oryzaeを対象として、外来ペプチドを細胞表層に局在させる発現系の開発を行っている。糸状菌では細胞表層に外来ペプチドを局在化して発現させるシステムが知られていない。そこで、糸状菌および担子菌の細胞表層に大量に存在することが明らかにされつつある低分子量の疎水性蛋白質ハイドロフォービンをコードする遺伝子をA.nidulansからクローン化して塩基配列を確認した。次に、ハイドロフォービンのアミノ酸配列の中で保存性の高い領域を元にプライマーを設計しA.oryzaeの染色体DNAに対してPCRを行った。増幅されたDNA断片をプローブに用いて、ハイドロフォービンの全長をコードする遺伝子および対応するcDNAをクローン化し塩基配列を決定してこの遺伝子をhypAと命名した。推定されるHypA蛋白質は151アミノ酸からなり、A.nidulansのハイドロフォービンと57%の相同性を有し、ハイドロフォーピンに特有の8個のCys残基は完全に保存されていた。hypA蛋白質中の配列の一部をmyc抗原ペプチドと置換した融合ハイドロフォービンを作製し、A.oryzaeに導入したところ細胞表層へのmyc抗原の発現が観察された。次は重金属吸着ペプチドを挿入した融合ハイドロフォービンの麹菌における発現と、宿主の重金属吸着能を検討する予定である。

Heavy metal absorption, environmental purification, use of microorganisms, heavy metals Combining the basic technology of molecular breeding of squid-like bacteria on the surface of cells, we established the purpose of することを. Aspergillus nidulans, the most important part of the industry, the most important part of the science, Aspergillus nidulans Oryzae を対 resembles として, foreign ペプチドをcell surface にbureau in させる発existing system の开発を行っている. The surface layer of the rice-shaped bacteria is a foreign material. There is a large amount of water-based protein in the cell surface of the basidiomycete bacteria and Basidiomycetes. Quality ハイドロフォービンをコードする伝子をA.nidulansからクローン化して婩婩组をconfirmationした. Sub-に、ハイドロフォービンのアミノAcid arrangementの中でPreservabilityの高い区を元にプライマーをDesignしA.oryzaeのChromosomeDNAに対してPCRを行った. Amplified されたDNA fragment をプローブに用いて、ハイドロフォービンのfull length をコードする伝子おThe よび対応するcDNAをクローン化し塩综合arrayをdeterminationしてこの缝子をhypAとnamed it. Presumed されるHypA protein は151アミノ acid からなり、A.nidulans のハイドロフォービンThere is 57% identity, and the 8 Cys residues unique to the ハイドロフォーピンに are completely preserved. Part of the arrangement in hypA protein is the myc antigen replacement and fusion. The production of A. oryzae was carried out by introducing the myc antigen into the cell surface layer. Sub-heavy metal absorption ペプチドをinsert したfusion ハイドロフォービンの麹The ability of the bacteria to absorb heavy metals is determined by the appearance of the bacteria and the heavy metal adsorption ability of the host.