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重金属結合ペプチドの糸状菌細胞表層へのターゲッティング

重金属结合肽靶向丝状真菌细胞的表面层

基本信息

批准号：
12019213
负责人：
北本勝ひこ
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019213/
关键词：
Aspergillus oryzae ハイドロフォービン hypA hypB 細胞表層工学 bioremediation 重金属吸着分子育種

项目摘要

微生物菌体に重金属を吸着させてバイオソルベントとして利用することを目的として、微生物に重金属結合能を付与する分子育種を試みている。これまでに筆者らは酵母の細胞表層GPIアンカー蛋白質Cwp1とHisクラスターをタカアミラーゼに組み込んだ融合蛋白質(TAA-His-Cwp1)および主として細胞壁に局在するインベルターゼとメタロチオネインとの融合蛋白質(Suc2-Cup1)を設計し、酵母の細胞壁中に発現することとNi,Cuイオンの吸着能が1.6〜3.5倍に増加することを見出している。大きな菌塊を形成する糸状菌をバイオソルベントととして利用するため、我が国では産業的に重要な麹菌(Aspergillus oryzae)を宿主として用いた。糸状菌における細胞表層工学のシステムを構築するために、糸状菌の細胞表層に局在するハイドロフォービンをコードする遺伝子をA.oryzaeから2つクローン化し、それぞれhyPA,hypBと命名した。さらに麹菌からmRNAを調製し、hypA,hypBに対応するcDNAを単離し、塩基配列を解析した。予想されるHyPA蛋白質はN末端に21アミノ酸のシグナル配列を含む151アミノ酸、HypBは21アミノ酸のシグナル配列を含む145アミノ酸からなっていた。双方ともにハイドロフォービンに特有の一定の法則に従って並ぶ8つのCys残基および疎水性領域が保存されていた。Northern blot解析によりhypAおよびhypB遺伝子の培地による発現制御の解析を行ったところ、両遺伝子とも液体の富栄養培地では発現されなかった。小麦フスマを用いた固体培養およびグルコース欠乏培地で培養した時には大量のmRNAの発現が認められ、厳密な発現制御が行われていることが明らかとなった。ハイドロフォービンを細胞表層アンカーとして用い機能ペプチドの発現への道が拓けると期待している。

Microbial cells absorb heavy metals and utilize them The purpose is to use the heavy metal binding ability of microorganisms and to provide the molecular breeding test.これまでにThe authorらはYeast cell surface GPIアンカーprotein Cwp1とHisクラスターをタカアミラーゼに组み込んだfusion protein (TAA-His-Cwp1)および主として Cell wall にbureau in するイDesign of ンベルターゼとメタロチオネインとの fusion protein (Suc2-Cup1), yeast cell wall中に発appears することとNi, CUイオンのsorption energy が1.6~3.5 times に Increase plus することを见出している. Aspergillus, an important Aspergillus bacterium used in Japan's domestic industry, is used to form Aspergillus, a large strain-shaped fungus. oryzae)をhostとして用いた. The cell surface engineering of the rice-shaped bacteria, the cell surface engineering of rice-shaped bacteria, and the construction of the cells of the rice-shaped bacteriaンをコードする伝子をA.oryzaeから2つクローン化し、それぞれhyPA,hypBとnamingした.さらに麹からmRNAをmodulationし,hypA,hypBに対応するcDNAを単isoし, and hydroxyl alignmentをanalysisした. Yuxiang HyPA protein は N-terminal に 21 アミノ acid のシグナル arrangement を contains 151 アミHypB's 21 アミノ acid のシグナル contains 145 アミノ acid からなっていた. Both sides are unique to the certain rules of the law and the Cys residues in the 8-step aqueous field are preserved. Northern Blot analysis Analysis of を行ったところ、両伝子とも Liquid の富栄nurturing ground では発appears されなかった. Wheat フスマを Use solid culture およびグルコース lack of soil cultivation した time には a lot of のm RNAの発appearsがcognizeめられ, and the secret of the secret controls the control of the royal family.ハイドロフォービンをThe surface of the cell is a functional one.