肝特異機能をもつ培養化ヒト肝細胞のHCVによる発癌

点击翻译按钮获取中文摘要

ヒト肝細胞を使用したHCVによる発癌の研究は国内外でほとんどなされていない。その理由は実験の目的に適うヒト培養肝細胞株がないことによる。我々は、ヒト胎児肝細胞にSV40LT抗原遺伝子を導入することにより種々の肝特異的機能をもつ不死化ヒト肝細胞株(OUMS-29)を樹立している。本研究は、OUMS-29細胞をHCVのコアおよびNS3タンパク質により癌化させることができるかどうか調べることを目的とした。HCV遺伝子をコードするプラスミドから、全長のコアおよびNS3遺伝子をPCRにより増幅し、発現ベクターに組み込んでプラスミドpIRES/coreとpIRES/NS3を作製した。これらのプラスミドをOUMS-29細胞にリポフェクション法によりトランスフェクトし、ハイグロマイシン存在下で増殖する細胞を継代培養した。ノザンブロットによりコアおよびNS3の発現を調べたところ、それぞれ1クローンがコアおよびNS3を安定に発現していることが認められた。これらの細胞はいずれも親株のOUMS-29細胞と比較して細胞の形態的変化は認められなかった。また、これらの細胞株が癌化能を獲得しているかどうかについては期間中に解析できなかった。