肝特異機能をもつ培養化ヒト肝細胞のHCVによる発癌

HCV诱导的具有肝脏特异性功能的培养人肝细胞的癌变

• 批准号: 11138235
• 负责人: 難波 正義
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11138235/
• 关键词: HCV; core遺伝子; NS3遺伝子; 不死化ヒト肝細胞株; 癌化

ヒト肝細胞を使用したHCVによる発癌の研究は国内外でほとんどなされていない。その理由は実験の目的に適うヒト培養肝細胞株がないことによる。我々は、ヒト胎児肝細胞にSV40LT抗原遺伝子を導入することにより種々の肝特異的機能をもつ不死化ヒト肝細胞株(OUMS-29)を樹立している。本研究は、OUMS-29細胞をHCVのコアおよびNS3タンパク質により癌化させることができるかどうか調べることを目的とした。HCV遺伝子をコードするプラスミドから、全長のコアおよびNS3遺伝子をPCRにより増幅し、発現ベクターに組み込んでプラスミドpIRES/coreとpIRES/NS3を作製した。これらのプラスミドをOUMS-29細胞にリポフェクション法によりトランスフェクトし、ハイグロマイシン存在下で増殖する細胞を継代培養した。ノザンブロットによりコアおよびNS3の発現を調べたところ、それぞれ1クローンがコアおよびNS3を安定に発現していることが認められた。これらの細胞はいずれも親株のOUMS-29細胞と比較して細胞の形態的変化は認められなかった。また、これらの細胞株が癌化能を獲得しているかどうかについては期間中に解析できなかった。

The use of HCV in liver cancer prevention research has been widely studied at home and abroad. The reason for this is to cultivate liver cell lines. We introduced SV40LT antigen into fetal hepatocytes and established an immortal hepatocyte cell line (OUMS-29) with liver-specific functions. In this study, OUMS-29 cells were treated with HCV and NS3 cells. HCV gene expression is controlled by PCR amplification and detection of HCV gene expression in pIRES/core and pIRES/NS3. The cells were cultured in vitro in the presence of a variety of enzymes. The first step is to adjust the frequency of occurrence of NS3 and to adjust the frequency of occurrence of NS3. OUMS-29 cells were compared with their parental strains. The cell lines were transformed into cancer cells, which were then analyzed.

项目成果

Kobayashi,N.,Miyazaki,M.,Inoue,Y., and Namba,M., et al.: "Transplantation of highly differentiated immortalized human hepatocytes to treat acute liver failure"Transplantation. 69. 202-207 (2000)

Kobayashi,N.、Miyazaki,M.、Inoue,Y.和Namba,M.等人：“移植高度分化的永生化人肝细胞以治疗急性肝衰竭”移植。