遺伝子標的法を用いた新規がん関連遺伝子の同定および機能解析

利用基因打靶方法鉴定新的癌症相关基因并进行功能分析

基本信息

批准号：
11138241
负责人：
白澤専二
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11138241/
关键词：
大腸癌 K-ras がん関連遺伝子シグナル伝達

项目摘要

固形腫瘍において、K-ras遺伝子の変異は高頻度に観察されるが、変異K-Rasの発癌における役割については、充分に解明されていない。この研究では、大腸癌細胞株HCT116とその変異K-rasを遺伝子標的法を用いて欠失させたクローンHKe3を利用することにより、変異K-rasにより発現制御される新規の癌関連遺伝子を単離すること、および変異K-Rasのシグナル伝達機構を解明することを目的とした。1)HCT116とHKe3の間でPCR法を利用したサブトラクションcDNAライブラリーを作製し、HCT116のみに強発現するcDNAフラグメントを単離し、その全長鎖のcDNA配列を決定した結果、(1)新規の遺伝子として、N末にbasic Zip転写因子のbasic domainを持つ1259アミノ酸からなるXCS1遺伝子、トランスポーターと相同性を持つ506アミノ酸からなるTrapXを、(2)既知の遺伝子としてMig6、Wnt-16、Epiregulinを同定した。2)XCS1遺伝子大腸粘膜における発現は微弱であるが、多数の大腸癌細胞株において強発現が観察された。正常組織においては膵臓で最も強く発現が観察された。XCS1のマウスのgenomic DNAを単離し、そのmappingを行い、遺伝子欠損マウス作製のプロジェクトを開始した。3)大腸癌細胞において変異K-rasはERKの活性化には関与しないが、TPA刺激によるSEK1-JNKの活性化の経路を特異的に抑制していることを明らかにした。今後は新規および既知癌関連遺伝子の機能解析とそれぞれの遺伝子型産物のクロストークを中心に解析を進行させる予定である。

在实体瘤中经常观察到K-RAS基因中的突变，但是突变K-RAS在癌变中的作用尚未完全了解。这项研究旨在通过使用克隆HKE3来隔离突变k-Ras表达的新型癌症相关基因，其中使用基因靶向方法删除了结肠癌细胞系HCT116及其突变k-Ras，并阐明突变K-RAS的信号机制。 1）使用PCR方法在HCT116和HKE3之间制备了减法cDNA文库，并分离了在HCT116中强烈表达的cDNA片段，并确定了全长链的cDNA序列。结果，（1）新型基因被鉴定为XCS1基因，由1259个氨基酸组成，其基本Zip转录因子的基本结构域在N末端，TRAPX，由506个具有转运蛋白同源性的氨基酸组成，（2）Mig6，Wnt-16，Wnt-16，以及已知的基因。 2）结肠粘膜中的XCS1基因表达很弱，但在许多结肠癌细胞系中观察到了强烈的表达。在正常组织的胰腺中观察到最强烈的表达。分离了XCS1小鼠的基因组DNA，并进行了映射，并开始一个项目产生基因缺陷小鼠。 3）我们发现突变K-RAS在结肠癌细胞中不参与ERK的激活，而是特别抑制了通过TPA刺激激活SEK1-JNK的途径。将来，我们计划继续对每种基因型产物的新的和已知的癌症相关基因和串扰的功能分析。