尿中HGF測定による泌尿器系腫瘍の早期診断法の開発

尿HGF检测泌尿系统肿瘤早期诊断方法的开发

• 批准号: 11140261
• 负责人: 大工原 恭
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140261/
• 关键词: 肝細胞増殖因子(HGF); 細胞分散因子(SF); 泌尿器系腫瘍; 酵素抗体法(ELISA); Fab'; IgY; 尿試料

本研究は、ヒトHGF ELISA系を尿中のHGFを測定出来るまでに高感度化し、泌尿器系腫瘍の早期発見、予後診断に応用することを目的として行ったものであり、以下の結果を得た。(1)組換え体ヒトHGFを抗原に用いてニワトリ及びウサギを免役し、それぞれ抗HGF卵黄抗体(IgY)及び抗HGF抗体(IgG)を調製した。(2)上記のIgy及びIgGをF(ab')_2化し、それぞれをHGFによるアフィニティーカラムで精製した後、さらにFab'化して、マレイミド基を導入したβーガラクトシダーゼと結合させたものを2次抗体とし、1次抗体にはマウス抗HGFモノクローナル抗体を用いてサンドイッチELISA系を調製した。(3)上記HGF ELISAの測定感度は、前者が20pg/ml、後者が2pg/mlであり、現在市販され臨床応用されているHGF ELISAの測定感度(0.2ng/ml)のそれぞれ10倍及び100倍であった。この測定感度は、これまでは濃縮しないと測定不能であった尿試料を、濃縮せずにHGFを直接測定することが可能な感度である。(4)健常者尿試料を用い、これら2種のELISAの回収試験、希釈試験、再現試験を行ったところ、いずれも満足すべき結果が得られた。(5)健常者尿試料(n=19)中のHGF濃度は、4.1〜66.3pg/mlであったが、これをそれぞれのクレアチニン濃度で補正すると、19.3±7.1(SD)pg/mgクレアチニンであった。HGFは、ガラスやプラスティック表面、あるいは限外濾過膜に吸着し易く、濃縮操作を行うと測定結果に誤差を生ずる可能性が高い。上記の結果は、煩雑な濃縮操作を行うことなく、尿中HGF濃度の正確な測定が可能であることを示すものである。現在、種々の泌尿器系腫瘍及び炎症患者の尿試料を測定を試み、診断薬としての可能性を検討中である。

This study aims to detect HGF in urine by HGF ELISA, and to provide high sensitivity, early detection, and late diagnosis of urinary tract tumors. (1)The anti-HGF antigen is prepared by using Chinese-made and anti-HGF egg yolk antibodies (IgY) and anti-HGF antibodies (IgG). (2)The Igy and IgG F(ab')_2 were purified, Fab's were purified and Fab's were introduced into the Igy and IgG F(ab')_2. The Igy and IgG F (ab')_2 were purified and Fab's were introduced into the Igy and IgG F (ab')_2. The Igy and IgG F (ab')_2 were purified and Fab's were introduced into the Igy and IgG F (ab')_2. (3)The sensitivity of HGF ELISA was 20pg/ml and 2pg/ml, respectively. The sensitivity of HGF ELISA (0.2 ng/ml) was 10-fold and 100-fold higher than that of HGF ELISA (0.2 ng/ml). The sensitivity of this assay is not determined by concentration, but by direct determination of HGF. (4)The results of the two ELISA tests were obtained. (5)HGF concentrations in urine samples from healthy subjects (n=19) ranged from 4.1 pg/ml to 66.3 pg/ml, and were corrected to 19.3±7.1(SD)pg/mg. HGF has a high possibility of error in the determination of HGF, HGF. The above results indicate that the concentration of HGF in urine can be determined correctly. At present, the possibility of urine sample determination in patients with urinary tract tumors and inflammation is under discussion.

项目成果

Kajihara,T.,: "Espression of hepatocyte growth factor/scatter factor and c-Met in human dental papilla and fibroblasts from dental papilla."Arc.Oral Biol.. 44. 135-147 (1999)

Kajihara，T.，：“人牙乳头和牙乳头成纤维细胞中肝细胞生长因子/散射因子和 c-Met 的表达。”Arc.Oral Biol.. 44. 135-147 (1999)

Nakamura,O.: "Effect of rat fetuin on stimulation of bone resorption in the presence of parathyroid hormone."Biosci.Biotechnol.Biochem.. 63. 1383-1391 (1999)

Nakamura,O.：“在甲状旁腺激素存在的情况下，大鼠胎球蛋白对骨吸收刺激的影响。”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 63. 1383-1391 (1999)

Arakaki,N.: "Involvement of oxidative stress in tumor cytotoxic activity of hepatocyte growth factor/scatter factor."J.Biol.Chem.. 274. 13541-13546 (199)

Arakaki,N.：“氧化应激参与肝细胞生长因子/分散因子的肿瘤细胞毒活性。”J.Biol.Chem.. 274. 13541-13546 (199)

Ohnishi,T.: "Prostaglandin E2 predominantly induces production of hepatocyte growth factor/scatter factor in human dental pulp in acute inflammation."J.Dent,Res.. (印刷中). (2000)

Ohnishi, T.：“在急性炎症中，前列腺素 E2 主要诱导人牙髓中肝细胞生长因子/分散因子的产生。”J. Dent，Res（2000 年出版）。

Rafferty,B: "Expert Committee on Biological Standardization,WHO"Report of an international collaborative study of the proposed first international standard for rDNA-derived human hepatocyte growth factor/scatter factor.(印刷中). (2000)

Rafferty, B：“世界卫生组织生物标准化专家委员会”关于拟议的第一个 rDNA 衍生人肝细胞生长因子/分散因子国际标准的国际合作研究报告（2000 年出版）。