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舌の形成・再生におけるHGFの役割―マウス舌胚の器官培養によるアプローチ―

HGF 在舌头形成和再生中的作用 - 使用小鼠舌头胚胎器官培养的方法 -

基本信息

批准号：
13877313
负责人：
大工原恭
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度は、培養筋芽細胞と舌芽器官培養系を用いて、HGFが筋分化には抑制的に働くが、筋芽細胞の増殖と遊走には促進的に働いていることを報告した。今年度は、おもにマウス胚舌筋芽細胞を用いることにより、胎生期の細胞動態のより忠実な再現を試みて下記の結果を得た。1.前年度にin situ hybridization法により、筋特異的転写因子の発現を確認している胎生12日マウス舌芽をトリプシンで消化し、舌筋芽細胞を調製した。さらに、未分化な状態を維持するのに最適な血清濃度を検討した。2.1.の細胞を1%ウマ血清培地(分化培地)で48時間培養し、RT-PCR法を行ったところ、筋特異的転写因子であるmyoDとmyogeninのmRNAの発現が確認された。3.2.の培養系にHGFを添加し、RT-PCRを行ったところ、myoDとmyogeninの発現が抑制された。一方、BrdUの取り込み量を検討したところ、HGFにより舌筋芽細胞の増殖が促進された。4.培養筋芽細胞C2C12と舌筋芽細胞の培地にHGFを添加し、total RNAを抽出して、SYBR Green real time PCR法を行ったところ、MMP-9の発現が有意に促進されたが、MMP-2の発現には影響を与えないことを確認した。5.4.の系において、培地にPI3K inhibitorを添加したところ、MMP-9の発現は抑制された。上記の結果は、胎生期の舌筋芽細胞においてHGFは筋分化にはむしろ抑制的に働くが、舌筋芽細胞の遊走と増殖には促進的に働いており、その遊走には、PI3Kを介したMMP-9の活性化が関わっている可能性を示すものである。

In the previous year, the tongue bud organ culture of sprouts and sprouts in the previous year was reported in the reports of the use of muscle buds, the inhibition of HGF muscle differentiation, and the promotion of cell proliferation and migration. This year, the embryo tongue muscle bud cell was used in this year, and the results of the test were obtained again in the fetal period. 1. In the previous year, the writing factors of the in situ hybridization method and the tendons were confirmed that the fetal birth was 12 days, the tongue buds were digested, and the tongue buds were born on the 12th day. The most sensitive and undifferentiated statuses maintain the most sensitive serum levels. 2.1. 1% of the cells were incubated with serum (differentiated culture) for 48 hours, and the RT-PCR method was used to detect the number of samples. The writing factor of myoD culture myogenin culture mRNA was used to confirm the diagnosis. 3.2. The HGF is added, the RT-PCR is added, and the myogenin of myoD is suppressed. On the one hand, BrdU is responsible for the production of gluten buds. On the other hand, HGF is used to promote the proliferation of gluten buds. 4. C2C12 sprouts, tongue buds, HGF, total RNA, SYBR Green real time PCR, MMP-9, MMP-2, and so on. 5.4. In the system, the PI3K inhibitor is added, and the MMP-9 is present to suppress the activity. The results of the previous study, the inhibition of the differentiation of HGF in the fetal stage, the inhibition of the proliferation of the germ of the tongue, the induction of the proliferation of the germ of the tongue, the activation of the MMP-9 in the fetal stage, the possibility of activation, the possibility of activation.