舌の形成・再生におけるHGFの役割―マウス舌胚の器官培養によるアプローチ―

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前年度は、培養筋芽細胞と舌芽器官培養系を用いて、HGFが筋分化には抑制的に働くが、筋芽細胞の増殖と遊走には促進的に働いていることを報告した。今年度は、おもにマウス胚舌筋芽細胞を用いることにより、胎生期の細胞動態のより忠実な再現を試みて下記の結果を得た。1.前年度にin situ hybridization法により、筋特異的転写因子の発現を確認している胎生12日マウス舌芽をトリプシンで消化し、舌筋芽細胞を調製した。さらに、未分化な状態を維持するのに最適な血清濃度を検討した。2.1.の細胞を1%ウマ血清培地(分化培地)で48時間培養し、RT-PCR法を行ったところ、筋特異的転写因子であるmyoDとmyogeninのmRNAの発現が確認された。3.2.の培養系にHGFを添加し、RT-PCRを行ったところ、myoDとmyogeninの発現が抑制された。一方、BrdUの取り込み量を検討したところ、HGFにより舌筋芽細胞の増殖が促進された。4.培養筋芽細胞C2C12と舌筋芽細胞の培地にHGFを添加し、total RNAを抽出して、SYBR Green real time PCR法を行ったところ、MMP-9の発現が有意に促進されたが、MMP-2の発現には影響を与えないことを確認した。5.4.の系において、培地にPI3K inhibitorを添加したところ、MMP-9の発現は抑制された。上記の結果は、胎生期の舌筋芽細胞においてHGFは筋分化にはむしろ抑制的に働くが、舌筋芽細胞の遊走と増殖には促進的に働いており、その遊走には、PI3Kを介したMMP-9の活性化が関わっている可能性を示すものである。