マウスポリコーム相同遺伝子群の機能解析

小鼠多梳同源基因的功能分析

• 批准号: 11154224
• 负责人: 東中川 徹
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Waseda University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11154224/
• 关键词: 遺伝子; ノックアウトマウス; ディフェレンシャル・ディスプレイ法; リン酸化; M33

1.M33ノックアウトマウスを用いたM33遺伝子の機能解析M33遺伝子の下流で機能する遺伝子ネットエアークを明らかにするために、M33ノックアウトマウスおよび正常マウスの13.5日胚よりそれぞれRNAを抽出しmRNAディフェレンシャル・ディスプレイ法により発現の変化の顕著なRNA種を検出することを試みた。同様の比較を新生マウスの各組織、およびノックアウトマウスより樹立した細胞株についても行った。本実験に先立って方法の信頼性を評価する実験を行い、雌のみに発現が限局されているXistの検出に成功した。約300プライマー対について比較を行った結果、4種のバンドに差を認めた。これらのバンドからcDNAをクローン化し、ドット・プロット法により真に差のあるクローンを選別し、そのいくつかについて塩基配列の決定を行い、データベースと比較した。すべて未知遺伝子であった。今後、これらの完全長cDNAをクローン化し解析を進める。2.Pc-Gタンパク質複合体の機能解析Pc-Gタンパク質複合体を構成するM33タンパク質について興味ある知見を得た。成体マウス肝ではM33タンパク質は他の組織、およびF9細胞のそれより早い移動度を示し、かつその大部分が細胞組織に局在することを見出した。核に微量存在し、かつ移動度の遅いM33をアルカリフォスファターゼ処理すると、細胞質のそれと同じ移動度の早い分子種に変化した。細胞増殖との関連を明らかにするため、肝再生下でのM33の移動度の変化を見たところDNAの合成に呼応してM33の移動度の低下が認められた。肝再生が完了すると再び移動度の早い分子種が出現した。これらの結果は、M33タンパク質が細胞の静止期では低リン酸化状態にありかつ細胞質に局在するが、細胞増殖期に入るとリン酸化を受け、かつ細胞核に移動し複合体を形成し機能することを示唆する。

1. M33 gene function analysis M33 gene downstream function analysis In the same way, we can compare the tissues of the new plants and establish the cell lines. The reliability of the proposed method was evaluated in the process of implementation, and the detection of Xist was successful in the process of implementation. About 300 pieces of paper are compared, and 4 kinds of paper are recognized. In this case, the cDNA sequence is changed, and the method is used to select the correct cDNA sequence, and the method is used to compare the cDNA sequence. It is unknown whether the child will be born. In the future, the complete cDNA analysis will be carried out. 2. Functional analysis of Pc-G complex. Adult liver M33 cells are free of other tissues, and F9 cells are free of early mobility. Most of the cellular tissues are free of early mobility. Nuclear micro-existence, mobility and early molecular species transformation Cell proliferation is related to M33 mobility, and liver regeneration is related to M33 mobility. Liver regeneration is complete, and early molecular species appear again. As a result, M33 cells are in a low acidification state during quiescent phase, and the cytoplasm is in a low acidification state during growth phase. The nucleus is in a mobile state, and the complex is formed.