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Rafに対するH-RasとR-Rasの作用の比較

H-Ras和R-Ras对Raf的影响比较

基本信息

批准号：
11160204
负责人：
小出寛
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

RasとR-Rasは,ともにセリン・トレオニンキナーゼRaf-1と結合することが報告されているが,RasだけがRaf-1のキナーゼ活性を上昇させることができる.このような機能の差違を生じさせる原因を解明する目的で,2種類の実験を平行して進めた.第一の実験としては,RasによるRaf-1活性化の分子メカニズムの解明を試みた.RasによるRaf-1の活性化においてRasの膜局在が必須であることから,本年度は膜画分にRaf-1活性化因子が存在する可能性を検討した.その結果,細胞膜にRaf-1活性化因子が存在するのではなく,Rasが脂質二重膜上に存在することがRaf-1の活性化に必要であることが明らかになった.またRasが膜上で二量体を形成していることや,人工的に二量体化させたRasは,Raf-1の活性化において膜への局在を必要としないことを示した.これらの結果から,細胞膜上でのRasの二量体化がRaf-1の活性化に重要であると考えられた.第二の実験としては,RasおよびR-Rasに存在するRaf-1活性化を促進(もしくは抑制)する領域の検索を行った.種々のRasとR-Rasのキメラ分子を作製し,これらのキメラ変異体のRaf-1活性化能を測定した.その結果,R-RasのN末端26アミノ酸残基がR-RasによるRaf-1の活性化において負の制御ドメインとして機能している可能性が示唆された.さらにN末端26アミノ酸を用いてアフィニティーカラムを作製し,これにラット脳から調製した粗抽出液を添加したところ,この26アミノ酸に特異的に結合すると思われるバンドを見い出した.

RasとR-Rasは,ともにセリン・トレオニンキナーゼRaf-1とcombinationすることがreportされているが,RasだけがRaf-1のキナーゼActivityをriseさせることができる.このような machine The reason for the deviation of the ability is the reason for the explanation of the purpose, and the two kinds of parallels are the same. The first one is the first one.ては,RasによるRaf-1 activated molecule メカニズムの解明をtestみた.RasによるRaf- 1. Activation of the Ras membrane is a must. This year's membrane painting is divided into Raf-1 activation. There is a possibility that the factor does not exist. The result is that the factor that activates Raf-1 in the cell membrane does not exist. The presence of Ras on the lipid double membrane is necessary for the activation of Raf-1.なった.またRasがThe formation of the two-dimensional body on the membraneしていることや, the artificial two-dimensional body transformationさせたRasは, The activation of Raf-1 is necessary for the activation of the membrane and the result of the activation of Raf-1, cells. It is important to activate Ras on the membrane and activate Raf-1 in two quantities.は,RasおよびR-RasにpresenceするRaf-1 activationをpromotion (もしくはinhibition)するfieldの検So を行った.kind of 々のRasとR-Rasのキメラmolecule をmakingし,これらのキメラ変variantのRaf -1 Activation energy measurement results, R-Ras N-terminal 26 アミノ acid residues R-Ras The activation of Raf-1 means the possibility of negative control and the function of Raf-1. The N-terminal 26 アミノ acid is made with いてアフィニティーカラムを, and the これにラット脳から modulated rough extraction The liquid is added to the liquid, and the specific に26 アミノ acid is combined with the すると思われるバンドを见い出した.