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単一神経細胞で発現するmRNAの定量的解析法の開発

单个神经元表达mRNA定量分析方法的开发

基本信息

批准号：
11170232
负责人：
宋文杰
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11170232/
关键词：
potassium channels α subunit β subunit single cell RT-PCR cholinergic interneuron striatum serial dilution

项目摘要

多様に分化した神経細胞における遺伝子の機能を研究するには、単一細胞レベルにおいて遺伝子の発現とその機能を調べる必要がある。しかし、遺伝子の発現と機能を対応させるために、その両方の定量化が必要であるが、単一細胞レベルでのmRNAの発現量は極めて微量なため、その定量方法は確立されていない。本研究の目的は単一神経細胞で発現するmRNAの定量方法を確立することである。本研究では、検出確率法と連続希釈法という二つの方法を提案し、平成11年度と12年度の2年間において検証することとしていた。検出確率法の理論的背景として、単一細胞のcDNAのある分量(1/n)を用いてPCRを行うことは、一個の細胞のcDNAをn個のチューブに分けることになる。発現量が少ない場合、目的のcDNAがあるチューブに入る確率はポアソン分布に従うと考えられ、分量を一定にすれば検出確率が発現量を反映する。一方、連続希釈法では検出閾値希釈倍率が発現量を反映する。本研究代表者らはラット線状体コリン作動性細胞の一過性K+電流はKv4.2、遅延整流性K+電流はKv1.1とKv1.2によってコードされていることを明らかにしてきた。また、コリン作動性細胞においてKvβ1とKvβ2の発現も見られる。コリン作動性細胞のK+電流の生後発達を調べた結果、生後4週の間に、一過性電流も遅延整流性電流も増加することが認められた。従って、生後発達においてK+チャネル遺伝子の発現量の増加があるものと考えられる。単一コリン作動性細胞のcDNA分量を1/4に固定し、出生から生後4週まで、週ごとにKv1.1,Kv1.2及びKvβ1とKvβ2の検出確率を調べた結果、そのいずれも発達に従っての増加が認められた。一方、連続希釈法をKv4.2に適用した結果、生後発達において、電流の増加とともに、閾値希釈倍率が増加したことが明らかになった。これらの結果は本研究で提案したアプローチの有効性を強く示唆するものである。

It is necessary to study the function of multi-cell differentiation and gene expression and regulate the function of multi-cell differentiation and gene expression. It is necessary to quantify the expression of mRNA in a single cell and to establish a quantitative method for its expression. The aim of this study was to establish a quantitative method for mRNA expression in neurons. This study proposes two methods for evaluating the accuracy of the test results, and two methods for evaluating the accuracy of the test results in 2011 and 2012. The theoretical background of the method is that the cDNA of a single cell has a component of (1/n), and the cDNA of a single cell has a component of (1/n). When the detection quantity is small, the detection accuracy of the target cDNA is reflected in the detection quantity. A party, even if the method of detection threshold value, magnification and detection amount of reflection The transient K+ current of the active cells in the linear body is Kv4.2, and the delayed rectifier K+ current is Kv1.2. Kvβ1 and Kvβ2 are active cells. K+ currents in activated cells increase after birth, and transient currents increase after birth. The increase in the occurrence of K+ The cDNA component of a single active cell was fixed at 1/4 of the time, and the accuracy of detection of Kv1.1, Kv1.2, and Kvβ1 and Kvβ2 was adjusted at 4 weeks after birth. The method Kv4.2 is applicable to a single party, and the result is that the current is increased and the threshold value is increased. The results of this study are consistent with those of this study.