寄生植物を用いた,光合成系遺伝子の色素体依存的な発現制御領域の解析

利用寄生植物分析光合基因的质体依赖性表达控制区

• 批准号: 11874117
• 负责人: 山田 恭司
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11874117/
• 关键词: ネナシカズラ; rbcS遺伝子; cab遺伝子; 5'上流制御領域; シス制御配列; 光応答的発現; 組織特異的発現; 色素体依存的発現; ゲノミックDNAクローン; rbcS; シス配列; 葉緑体依存的発現

(1)ネナシカズラから単離した2種類のrbcS遺伝子(GrbcS1,GrbcS2)の翻訳開始点の上流領域(GrbcS1では1517bp,GrbcS2では1264bp)を植物への遺伝子導入用のベクターpBI101に組み込み、ネナシカズラのrbcSプロモーターとGUS遺伝子をつないだプラスミドを作成した。現在、アラビドプシスへの形質転換を進めつつある。(2)ネナシカズラのcab遺伝子については、ゲノミックサザン解析を行ったところ、EcoRI 2.8kb,BamHI13kb,EcoRV 6.6kb HindIII 5kb,SspI 1.7kbの各断片にハイブリダイズすることが確認できた。したがって、ネナシカズラcab遺伝子は1コピーであることが示唆された。(3)ネナシカズラのゲノムDNAを鋳型としたPCRによってネナシカズラcab遺伝子の増幅を試みた。ネナシカズラのゲノムサイズはヒトの10倍ほどもある巨大なものであるため、PCRによる増幅も困難であったが、60サイクル以上の増幅を行うことにより、cab遺伝子のコード領域を増幅・クローン化することができた。その結果、ネナシカズラcab遺伝子のコード領域にはイントロンが存在していないことが明らかになった。(4)ネナシカズラcab遺伝子の上流領域については、PCR法による増幅ができなかった。そこで、ネナシカズラcab遺伝子の上流領域が存在すると考えられるHindIIIの5kb断片をクローニングするために、ゲノムDNAをHindIIIで切断後5kbの断片を抽出し、それをファージベクターλZAPIIにクローン化してゲノミックライブラリーを作成した。このライブラリーに対して現在スクリーニングを行っており、第2次スクリーニングまで進行中である。

(1) ネ ナ シ カ ズ ラ か ら 単 from し た 2 kinds の rbcS heritage 伝 child (GrbcS1 GrbcS2) の 訳 start point の upper area (GrbcS1 で は 1517 bp, GrbcS2 で は 1264 bp) を plant へ の posthumous son 伝 import with の ベ ク タ ー pBI101 に group み 込 み, ネ ナ シ カ ズ ラ の rb CS プ ロ モ ー タ ー と GUS posthumous son 伝 を つ な い だ プ ラ ス ミ ド を made し た. Now, アラビドプシスへ the shape and mass 転 are replaced by を into め ある ある ある. (2) ネ ナ シ カ ズ ラ の cab posthumous son 伝 に つ い て は, ゲ ノ ミ ッ ク サ ザ ン parsing line を っ た と こ ろ, EcoRI 2.8 KB, BamHI13kb, EcoRV 6.6 KB HindIII 5 KB, SspI 1.7 KB の each fragment に ハ イ ブ リ ダ イ ズ す る こ と が confirm で き た. Youdaoplaceholder5 たがって, ネナシカズラcab remains 伝, たがって 1コピ である である とが とが indicates された. (3) ネ ナ シ カ ズ ラ の ゲ ノ ム DNA を type where と し た PCR に よ っ て ネ ナ シ カ ズ ラ cab heritage 伝 son の rights of を try み た. ネ ナ シ カ ズ ラ の ゲ ノ ム サ イ ズ は ヒ ト の 10 times ほ ど も あ る huge な も の で あ る た め, PCR に よ る rights of も difficult で あ っ た が, 60 サ イ ク ル の raised above picture line を う こ と に よ り, cab but 伝 の コ ー を ド field of rights, ク ロ ー ン change す る こ と が で き た. そ の results, ネ ナ シ カ ズ ラ cab heritage 伝 son の コ ー ド field に は イ ン ト ロ ン が exist し て い な い こ と が Ming ら か に な っ た. (4) ネ ナ シ カ ズ ラ cab posthumous son 伝 の upper field に つ い て は, PCR method に よ る rights of が で き な か っ た. そ こ で, ネ ナ シ カ ズ ラ cab posthumous son 伝 の が upper field exist す る と exam え ら れ る HindIII 5 KB fragment の を ク ロ ー ニ ン グ す る た め に, ゲ ノ ム DNA を HindIII で cut off after 5 KB の を drew し fragment, そ れ を フ ァ ー ジ ベ ク タ ー lambda ZAPII に ク ロ ー ン change し て ゲ ノ ミ ッ ク ラ イ ブ Youdaoplaceholder0 ラリ を を is made as た. こ の ラ イ ブ ラ リ ー に し seaborne て now ス ク リ ー ニ ン グ を line っ て お り, second ス ク リ ー ニ ン グ ま で underway で あ る.

项目成果

Asamizu T.,Halide R.,Yamada K.: "Transgenic sesame plants by MAT vector system (I)"Ann. Rep. Toyama Pref. Inst. Pharm. Res.. 33-38 (1999)

Asamizu T.，Halide R.，Yamada K.：“通过 MAT 载体系统转基因芝麻植物（I）”Ann。

Tsudzuki,T. et al.: "Comparative analysis of RNA editing sites in higher.."J.Mol.Evol.(The Jukes special issue). (in press). (2001)

都筑，T.

Asamizu,T. et al.: "Transgenic sesame plants by MAT vector system (II)..."Ann.Rep.Toyama Pref.Inst.Pharn.Res.. 27. (2001)

浅水，T.

Wakasugi,T. et al.: "The genomics of land plant chloroplasts : Geno..."Photosynthesis Res.(Genomics issue). (in press). (2001)

若杉，T.

Tada,Y. et al.: "Developmental regulation of a gene coding for a low-"Plant Cell.Physiol.. 41(12). 1373-1380 (2000)

多田，Y.