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心筋細胞興奮性の遺伝子工学的制御-バイオペースメーカーの可能性の探求

心肌细胞兴奋性的基因工程控制——探索生物起搏器的潜力

基本信息

批准号：
11877116
负责人：
児玉逸雄
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

当初計画していた、Kir2.1チャネルのアンチセンスをリポフェクチンを用いて心房筋に導入する方法は、細胞内への導入効率が非常に悪いため、Kir2.1チャネルのドミナントネガティブ突然変異体遺伝子(チャネルイオン孔領域にあるK^+イオン選択フィルタ部分のGYG motifをすべてアラニンで置換したKir2.1-AAA)を作成し、アデノウイルスを用いて導入する方法に変更した。野生型および突然変異体Kir2.1チャネルの細胞内における局在性を調べるためにKir2.1チャネルを緑色蛍光色素(GFP)で標識し、HEK293cellに発現させその局在性を確認したところ、野生型、突然変異体および共発現時いずれの場合も細胞膜に沿って発現しているのが観察された。次にKir2.1-AAAの野生型チャネルに対する効果を調べるために野生型およびAAA突然変異体のcRNAを作成し、アフリカツメガエル卵母細胞に注入した。その結果、野生型とAAA突然変異体を共発現させたグループでは野生型のみを注入したグループに比べ、Kir2.1電流は60%減弱していた(野生型:AAA変異体=1:5注入時)。現在、Kir2.1-AAAcDNAを組み込んだアデノウイルスを作成しており、組み込みが確認され次第培養心房筋細胞にKir2.1-AAA遺伝子を導入し、その効果-特に自動能の変化について調べる。また、申請時の内容に沿い、遺伝子導入した培養心房筋細胞を成熟マウス心に移植し、その効果を調べる予定である。

The original plan was for Kir2.1 Kir2.1 Novel The method of introducing チンを using いて atrial muscle is very high, and the efficiency of への introduction into cells is very high.いため、Kir2.1チャネルのドミナントネガティブSudden transformation of the alien body子(チャネルイオン空区にあるK^+イオン选択フィルタpartのGYG The motifをすべてアラニンでsubstitutionしたKir2.1-AAA)をmadeし,アデノウイルスをいて importedするmethodに変changedした. Wild-type allogeneic Kir2.1 allogeneic Kir2.1 intracellular localized Kir2.1 green photopigment (GFP) marker, HEK 293cell's sex is confirmed, wild type, sudden mutationおよび合発appears いずれのoccasion もcell membrane に Along って発appears しているのが観看された. Kir2.1-AAA wild type チャネルに対する effect を Adjustment べるためにwild type およAllogeneic cRNA was produced by AAA suddenly, and it was injected into the oocytes of AFRIKA. As a result, the wild-type AAA suddenly changed into the allogeneic body and appeared together. The wild-type AAA was injected into the body. The Kir2.1 current is reduced by 60% (wild type: AAA variant = 1:5 when injected). Now, Kir2.1-AAAcDNA has been produced and confirmed. The first culture of atrial myocardial cells is the introduction of Kir2.1-AAA, the effect of special automatic energy transformation, and the adjustment of the effect. According to the content at the time of application, the transplantation of mature atrial myocardial cells and the transplantation of mature atrial myocardial cells after the introduction of the remaining seeds are determined.