蛍光色素呑食を応用した生体眼抗体標識及び画像化に関する研究

利用荧光染料吞噬对活体眼睛进行抗体标记和成像的研究

• 批准号: 11877299
• 负责人: 本田 孔士
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877299/
• 关键词: ラット; 走査型レーザー検眼鏡; 蛍光標識マイクロスフィア; マクロファージ; 抗P-selectin抗体; 走査線レーザー検眼鏡

走査型レーザー検眼鏡観察下での抗体の可視化に関し、ラットマクロファージへの蛍光標識、抗体付加を行いて、研究を行った。活性化したマクロファージの回収はラット腹腔にチオグリコレートを注入して数日後に腹腔洗浄することにより行い、この活性化マクロファージ培養液中に、蛍光標識したゼラチンから作成したマイクロスフィアをラット血清によってオプソナイズした後加え、マクロファージに蛍光標識マイクロスフィアを貪食させた。3-6個の蛍光標識マイクロスフィアが貪食されていりことが蛍光顕微鏡下で確認されたこれらのマクロファージをラットの静脈内に投与したところ、走査型レーザー検眼鏡を用いることにより、生体眼で眼内を循環するマクロファージを蛍光点として観察することができた。以前、抗体を直接蛍光標識したものをラットの静脈内に投与したところ、走査型レーザー検眼鏡では蛍光を検出できなかったため、今回はこの蛍光標識マイクロスフィアを貪食させたマクロファージと抗体を結合することにより、生体内での抗体の可視化が可能であるか検討した。抗P-selectin抗体をラット抗体のFc断片を介してマクロファージに結合したところ、P-selectinへの親和性を維持していることが培養系にて確認された。この抗体付加蛍光標識マクロファージをラットの静脈内に投与したところ、走査型レーザー検眼鏡によって蛍光点として観察でき、またこの蛍光点は、免疫染色にて抗P-selectin抗体を結合したマクロファージであることが確認された。今後、この抗体付加蛍光標識マクロファージを用いた手法を用いて、様々な接着分子の発現の時間的、空間的な評のへの応用の可能性を検討する予定である。

Walkthrough type レ ー ザ ー 検 glasses 観 examine under で の antibody の visualization に masato し, ラ ッ ト マ ク ロ フ ァ ー ジ へ の 蛍 light logo, antibody to pay plus を い を line っ て, research た. Activeness し た マ ク ロ フ ァ ー ジ の back 収 は ラ ッ ト abdominal に チ オ グ リ コ レ ー ト を injection し て after days of に celiac す at る こ と に よ り い, こ の activeness マ ク ロ フ ァ ー ジ medium, に 蛍 light logo し た ゼ ラ チ ン か ら made し た マ イ ク ロ ス フ ィ ア を ラ ッ ト serum に よ っ て オ プ ソ ナ イ ズ し た え, add after マ ク ロ Youdaoplaceholder0 ファ ジに蛍 light indicates that ファ させた ロスフィアを ロスフィアを gluttonous させた. 3-6 の 蛍 light logo マ イ ク ロ ス フ ィ ア が gluttony さ れ て い り こ と が 蛍 optical 顕 microscopically で confirm さ れ た こ れ ら の マ ク ロ フ ァ ー ジ を ラ ッ ト の cast with intravenous に し た と こ ろ, walkthroughs レ ー ザ ー を 検 glasses with い る こ と に よ り, living body of the eye で す を cycle in eyes る マ ク ロ フ ァ ー ジ を 蛍 spot と し て 観 examine す る こ と が Youdaoplaceholder0 た た. , antibody を 蛍 directly before light logo し た も の を ラ ッ ト の cast with intravenous に し た と こ ろ, walkthroughs レ ー ザ ー 検 glasses で は 蛍 light を 検 out で き な か っ た た め, today back to は こ の 蛍 light logo マ イ ク ロ ス フ ィ ア を gluttony さ せ た マ ク ロ フ ァ ー ジ を と antibody combining す る こ と に よ り, born in vivo で の visualization が の antibodies may で あ る Youdaoplaceholder3 検 to claim た. P - selectin antibody resistance を ラ ッ ト antibody の Fc fragment を interface し て マ ク ロ フ ァ ー ジ に combining し た と こ ろ, P - selectin へ の affinity を maintain し て い る こ と が training department に て confirm さ れ た. こ の antibody plus 蛍 light logo マ ク ロ フ ァ ー ジ を ラ ッ ト の cast with intravenous に し た と こ ろ, walkthroughs レ ー ザ ー 検 glasses に よ っ て 蛍 spot と し て 観 examine で き, ま た こ の 蛍 spot は, immune dyeing に て resistance P - selectin antibody を combining し た マ ク ロ フ ァ ー ジ で あ る こ と が confirm さ れ た. In the future, こ の antibody plus 蛍 light logo マ ク ロ フ ァ ー ジ を with い た gimmick を with い て, others 々 な then molecular の 発 の now time, space, な review の へ の 応 possibility with の を beg す 検 る designated で あ る.

项目成果

Tsujikawa A,Kiryu J,Yamashiro K, et al.: "Interactions between blood cells and retinal endothelium in endotoxic sepsis."Hypertension. 36. 250-258 (2000)

Tsujikawa A、Kiryu J、Yamashiro K 等人：“内毒素败血症中血细胞和视网膜内皮之间的相互作用。”高血压。

Nonaka A,Kiryu J,Tsujikawa A, et al.: "Administration of 17beta-estradiol attenuates retinal ischemia-reperfusion injury in rats."Invest Ophthalmol Vis Sci.. 41. 2689-2696 (2000)

Nonaka A、Kiryu J、Tsujikawa A 等人：“施用 17β-雌二醇可减轻大鼠视网膜缺血再灌注损伤。”Invest Ophasemol Vis Sci.. 41. 2689-2696 (2000)

Tsujikawa A,Ogura Y,Hiroshiba N,et al.: "Retinal ischemia-reperfusion injury attenuated by blocking of adhesion molecules of vascular endothelium"Invest Ophthalmol Vis Sci.. 40. 1183-1190 (1999)

Tsujikawa A、Ogura Y、Hiroshiba N 等人：“通过阻断血管内皮粘附分子来减轻视网膜缺血再灌注损伤”Invest Ophamol Vis Sci.. 40. 1183-1190 (1999)

Tsujikawa A,Kiryu J,Nonaka A,et al.: "In vivo evaluation of platelet-endothelial interactions in retinal microcirculation of rats"Invest Ophthalmol Vis Sci.. 40. 2918-2924 (1999)

Tsujikawa A、Kiryu J、Nonaka A 等人：“大鼠视网膜微循环中血小板-内皮相互作用的体内评估”Invest Ophasemol Vis Sci.. 40. 2918-2924 (1999)

Tsujikawa A,Ogura Y,Hiroshiba N,Miyamoto K,Kiryu J,Honda Y.: "Tacrolimus (FK506) attenuates leukocyte accumulation after transient retinal ischemia"Stroke. 29. 1431-1437 (1998)

Tsujikawa A、Ogura Y、Hiroshiba N、Miyamoto K、Kiryu J、Honda Y.：“他克莫司 (FK506) 可减弱短暂性视网膜缺血后白细胞积聚”中风。