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mRNAの軸索輸送と神経成長円錐での蛋白合成

神经生长锥中 mRNA 的轴突运输和蛋白质合成

基本信息

批准号：
11878155
负责人：
桑野良三
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11878155/
关键词：
神経成長円錐 mRNA 蛋白合成海馬の初代培養軸索樹状突起免疫組織化学

项目摘要

個体発生の初期に展開する神経回路網形成の分子機構を解明するために、機能分子の探索と解析の研究を進めている。神経軸索先端にあって特殊な構造した神経成長円錐を研究材料とした。蔗糖密度勾配遠心法により成長円錐濃縮分画を調製した。この成長円錐を構成している膜蛋白をイオン交換クロマトグラフィー、HPLCを用いて系統的に分離精製した。精製した蛋白の部分アミノ酸配列およびcDNAクローニングを行いデーターベースを検索した。新規蛋白については抗体を作製し、脳の発達時期、部位別の蛋白発現とmRNAの変動を観察した。その結果、神経回形成期にのみ出現し、軸索の伸長、誘導、標的神経細胞の認識に関り、シナプス形成が完成すると共に消失する蛋白の中から新しい膜蛋白(gmp46と命名)をみつけた。gmp46の成長円錐における分子・細胞レベルでの機能解析を行なうと共に、本研究課題「mRNAの軸索輸送と神経成長円錐での蛋白合成」に適する蛋白であるかを詳細に検討した。1)gmp46は発達期の神経系に優先的(ほぼ特異的)に発現している。2)gmp46は神経系では今までに報告されていないイムノグロブリンスーパーファミリーに属する1回膜貫通型膜蛋白であった。3)初年度には、生体脳をより反映できる実験系の確立に向けて、軸索と樹状突起を識別できる初代培養細胞系(G.Bankerの方法)に成功した。この系を用いてマウス胎児海馬の神経細胞を培養した。gmp46の細胞内・外ドメインを認識する抗体、およびMAP2蛋白、PSD95に対する抗体での免疫組織化学の結果、mp46は神経成長円錐を含め神経細胞全体に分布していた。4)gmp46がシナプス形成の場に存在していた。これらのことから、gmp46が蛋白合成、移動、シナプスへの集積とgmp46mRNAの軸索移動について、本研究に適した蛋白であることが判った。神経成長円錐が超微量のため新しい実験・解析系を組み立てているところである。

In the early stage of individual development, the molecular mechanism of neural network formation is explained, and the functional molecule is explored and analyzed. The axon tip is specially constructed and the axon growth cone is studied. sucrose density matching distance center The composition of the growth cone was determined by HPLC. Part of the purified protein was identified by DNA sequencing. New regulation of protein expression, antibody activation, protein development, and mRNA activity The results, neurogenesis, axonal elongation, induction, target neurocell recognition, axonal formation, complete disappearance, protein development, membrane protein (gmp46), and so on. The molecular and cellular functions of the growth cone of gmp46 were analyzed in detail in this research project,"Axonal transport of mRNA and protein synthesis in the growth cone of the brain." 1)gmp46 appears in the middle of the development period in preference to (or specific to) the nervous system. 2)gmp46 is a protein that penetrates the membrane of the brain. 3)In the early years, the cell lines were successfully identified by the method of G.Banker. This system is used to culture fetal hippocampal neurons. Immunohistochemical results of antibodies against gmp46, MAP2 protein and psd95, and distribution of mp46 in the brain, including the whole brain. 4) GMP46 is the field of formation. This study was conducted to determine the protein synthesis, migration, aggregation and axonal migration of gmp46 mRNA. The growth rate of the brain is very small. The analytical system is composed of two parts.