MAGmRNAのスプライシング異常はニューロンとグリアとの接着を阻害するか

MAG mRNA 的异常剪接是否会抑制神经元和神经胶质细胞之间的粘附？

• 批准号: 04833007
• 负责人: 桑野 良三
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04833007/
• 关键词: 遺伝子導入; 培養細胞; レポーター遺伝子; ミエリン; mRNA

本研究ではニューロンーグリア細胞間の構造的機能的相互作用を追求するために、myelin associated glycoprotein(MAG)に着目した。MAG遺伝子の第12エクソンの挿入の有る無しの二種類のcDNAはすでにクローニングした。これらを神経系の初代培養細胞およびマウスを受精卵に導入して、神経軸索の認識・接着にどのように関与するかを細胞および個体レベルで解析することを目的とした。この研究目的を遂行するうえで、各々のcDNAを組織特異的に発現するベクターの開発が是非必要となった。昨年まで用いたベクターでは、内在性のlacZの酵素活性と遺伝子導入されたlacZ活性を明確に区別できなかった。特に培養細胞や個体の標本の作製条件によっては、非常に強い内在性のlacZがXgal染色によって観察された。そこで導入遺伝子のlacZに核移行シグナルの挿入を試みた。核移行シグナルをもつlacZ遺伝子に導入した時、lacZ蛋白が細胞核で発現していることが確認された。すなわち、核移行シグナルの有無によって、核に局在する導入遺伝子由来のlacZ蛋白と内在性の細胞質lacZ蛋白とを明確に区別できることができた。またプロモターの無いベクターでも一過性の遺伝子発現が見られたので、その上流にpoly(A)付加シグナルを挿入した。これによって非特異的な一過性の遺伝子発現が抑えられた。今回作製したベクターは、個体レベルでの遺伝子発現を観察する上で、非常に有効であることがわかった。このベクターを使った融合遺伝子を受精卵に遺伝子導入してトランスジェニックマウスを作製し、導入遺伝子の解析を行なっていきたい。

In this study, the functional interactions of the <s:1> structure between cells を pursue するために, myelin associated glycoprotein(MAG)に aim at た. MAG heritage 伝 son の エ 12 ク ソ ン の scions into の is る not し の two kinds の cDNA は す で に ク ロ ー ニ ン グ し た. こ れ ら を 経 god is の original culture cell お よ び マ ウ ス を fertilized egg に import し て, god 経 axon の understanding, then に ど の よ う に masato and す る か を cells お よ び individual レ ベ ル で parsing す る こ と を purpose と し た. こ の research purpose を carries out す る う え で, various 々 の cDNA を tissue specific に 発 now す る ベ ク タ ー の open 発 が is necessary と な っ た. Yesterday in ま で with い た ベ ク タ ー で は, internality の lacZ の enzyme activity と heritage 伝 son import さ れ た lacZ active を に clear distinction で き な か っ た. Special に culture cell や condition the individual の specimens の cropping に よ っ て は, very strong に い internality の lacZ が Xgal dyeing に よ っ て 観 examine さ れ た. Youdaoplaceholder0 で で import the derivative 伝 そ lacZに kernel to transition シグナ シグナ を <e:1> insert into を to try みた. Nuclear migration シ グ ナ ル を も つ lacZ posthumous son 伝 に import し た, lacZ protein が when the nucleus で 発 now し て い る こ と が confirm さ れ た. す な わ ち, nuclear migration シ グ ナ ル の presence of に よ っ て in innings, nuclear に す る import legacy 伝 son origin の lacZ protein と internality の cytoplasmic protein lacZ と を に clear distinction で き る こ と が で き た. No い ま た プ ロ モ タ ー の ベ ク タ ー で も transient の heritage 伝 son 発 が now see ら れ た の で, そ の upper に poly real (A) plus シ グ ナ ル を scions into し た. <s:1> れによって non-specific な transient cultural heritage 伝 exhibits が inhibition えられた. This time making し た ベ ク タ ー は, individual レ ベ ル で の heritage 伝 son 発 now を 観 examine す る で, very に have sharper で あ る こ と が わ か っ た. こ の ベ ク タ ー を make っ た fusion posthumous son 伝 を fertilized egg に posthumous son 伝 import し て ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を cropping し line, import but 伝 の analytic を な っ て い き た い.

项目成果

Shimizu,A.: "A molecular genetic linkage map of mouse chromosome 10,including the Myb,S100b,Pah,Sl.and Ifg genes." Biochem.Genet.30. 529-535 (1992)

Shimizu,A.：“小鼠 10 号染色体的分子遗传连锁图，包括 Myb、S100b、Pah、Sl. 和 Ifg 基因。”

Araki,K.: "Structure and expression of human and rat D2 dopamine receptor genes." Neurochem.Int.21. 91-98 (1992)

Araki,K.：“人类和大鼠 D2 多巴胺受体基因的结构和表达。”

桑野 良三: "アストロサイト遺伝子" 臨床検査. 36. 71-72 (1992)

Ryozo Kuwano：“星形胶质细胞基因”临床测试。36. 71-72 (1992)

Kumanishi,T.: "Human glial fibrillary acidic protein (GFAP):molecular cloning of the complete cDNA sequence and chromosomal localization (chromosome 17) of the GFAP gene." Acta Neurophathol.83. 569-578 (1992)

Kumanishi,T.：“人胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)：完整 cDNA 序列的分子克隆和 GFAP 基因的染色体定位（17 号染色体）。”

Morii,K.: "Cloning of cDNAs encoding human S-100 alpha amd beta subunits and their differential expression in human tumor cell lines." J.Neurosci Res.32. 27-33 (1992)

Morii,K.：“编码人类 S-100 α 和 β 亚基的 cDNA 的克隆及其在人类肿瘤细胞系中的差异表达。”