テロメアに特異的に転移するレトロトランスポゾンの機能解析

特异性转座到端粒的逆转录转座子的功能分析

• 批准号: 00J08289
• 负责人: 高橋 秀和
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J08289/
• 关键词: LINE; non-LTR型レトロトランスポゾン; SART1; TRAS1; カイコ; テロメア; 転移; in vitro

筆者はnon-LTR型レトロトランスポゾン(LINE)の転移機構を解明することを目的に研究を行ってきた。これまでに、カイコのテロメア反復配列(TTAGG)nに特異的に転移するSART1レトロトランスポゾンを、In vivoで転移させる系を確立した(Takahashi&Fujiwara, EMBO Journal 2002)。今年度はLINEの転移の詳細なメカニズムを解明するために、In vitroで転移を再現しようと試みた。まずSART1の2つのORFにコードされたタンパク質を、バキュロウイルスベクターから発現・精製した。これたのタンパク質を、SART1のRNA・dNTPsと共に、テロメア配列(TTAGG)nを含むDNA配列をインキュベートして、テロメア反復配列中にSART1が転移するかどうか調べた。方法にはPCRやサザンハイブリダイゼーションを用いたが、SART1が転移していることを示す結果は得られなかった。その原因の一つとして、LINEの転移にホスト生物の他のタンパク質が必須である可能性がある。LINEはウイルスなどと違い、転移はホストに強く依存していると考えられている。SART1の場合、テロメアのクロマチンタンパク質を認識して、転移しているのではないかもしれない。今後はまずテロメアなどのクロマチン構造を詳細に解析することによって、最終的にLINEの転移機構を解明したい。尚、SART1のORF1の詳細な機能解析にも共同研究者として参画し、核内局在シグナルなど転移に重要なドメインを解析した。この結果は現在投稿準備中である(Matsumoto, Takahashi and Fujiwara)。

The non- LTR model is designed to provide information on how to conduct research. (LINE) the transfer mechanism is responsible for the purpose of research. In order to make sure that the system is confirmed (Takahashi&Fujiwara, EMBO Journal 2002), it is necessary to assign the column (TTAGG)