消化器外科領域における自己生体素材を用いた再生医療の開発

自体生物材料再生医学在胃肠外科领域的发展

• 批准号: 21659301
• 负责人: 高橋 秀和
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659301/
• 关键词: 自己生体材料; 消化器外科領域; 脂肪由来幹細胞

成体由来の幹細胞のうち脂肪由来幹細胞(Adipose Derived Stem Cells;ADSC)は比較的採取が容易で魅力的である。近年では多分化能、血管新生効果などが報告され、すでに肝・腎などの再生、心筋梗塞の治療、形成外科領域などで応用されているが、消化器外科手術領域ではまだ報告がない。消化器外科手術領域における感染性合併症には、死腔が原因と考えられるものは少なからず存在し、死腔が原因であるがゆえに治療に難渋する症例も多い、今回、腹腔内の死腔をマウスモデルで作成し、脂肪による充填を行い、組織構築における脂肪由来幹細胞の効果を検討した。C57BL/6Jマウスのソケイ部の反下脂肪を摘出しコラゲナーゼによる処理にてADSCを採取し、10日間培養した。フローサイトメトリーにて血管固有のマーカーであるCD31の発現を確認した。10週齢のオスのC57BL/6Jマウスに対し、精巣周囲の脂肪組織を摘出し、死腔モデルとした。摘出した脂肪片を死腔に充填し、PBSに浮遊させた1×10^6個のADSCを腹腔内投与する群(ADSC群)と、PBSのみ腹腔内投与する群(PBS群)を比較検討した。移植後3,7,14,21日目にマウスを犠死させ,下記の検討を行った。(1)移植片生着重量,(2)H&E染色による充填組織像,(3)CD31による免疫染色による血管密度評価,(4)摘出組織より抽出したtotal RNAの定量PCRによる血管新生因子VEGF。フローサイトメトリーにおいて、脂肪由来幹細胞にCD31陽性細胞が約7%に存在した。充填物重量は3、7日目では両群間に有意差を認めなかったか、14,21日目ではADSC群において有意に死填物重量が大きかった。またH&E染色においてPBS群は出血梗塞単を多数認めた。CD31抗体を用いた免疫組織染色において、400倍視野におけるCD31陽性細胞数を計測すると、3,7,14日目においてADSC群か有意に多かった。移植片より抽出したtotal RNAを用いたPCRでは血管新生因子であるVEGFは3、7日目において、ADSC群において有意に多かった。以上より腹腔囚における遊離脂肪片生着に対してADSCの共移植は有効な手段であると考えられた。

Adipose Derived Stem Cells (ADSC) are relatively easy to adopt and attractive. In recent years, there have been reports on the effects of multiple differentiation, angiogenesis, liver and kidney regeneration, treatment of cardiac infarction, and surgical applications in the field of digestive surgery. In the field of digestive surgery, the causes of infectious complications, the causes of death, the existence of death, the causes of death, the treatment of death, the formation of death, the filling of fat, the origin of tissue architecture, and the effect of adipose stem cells are discussed. C57BL/6J has been cultured for 10 days. The discovery of CD31 was confirmed. C57BL/6J at 10 weeks of age A comparative study of 1×10^6 ADSC and PBS groups was conducted. 3, 7, 14, 21 days after transplantation, the following is a summary of the results. (1)Graft weight,(2)H&E staining, filling tissue image,(3) CD31 immunostaining, vascular density evaluation,(4) total RNA quantitative PCR, angiogenesis factor VEGF. CD31 positive cells are present in approximately 7% of adipose derived stem cells. Fill weight is 3, 7 days, 14, 21 days, 14 days, 21 days H&E staining was used to detect most of the lesions in PBS. CD31 antibody was used to detect CD31-positive cells in 400-fold field of view. Total RNA was extracted from the graft and PCR was used to detect angiogenesis factors such as VEGF and ADSC. The above mentioned methods of co-transplantation of ADSC are available.