大腸癌に対する新規Lgr5抗体を用いた創薬のための基礎研究

使用抗结直肠癌的新型 Lgr5 抗体进行药物发现的基础研究

• 批准号: 15H06376
• 负责人: 高橋 秀和
• 金额: $ 1万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06376/
• 关键词: Lgr5; がん幹細胞

昨年度は、Lgr5のエクソン5領域に対する抗体の性能評価、既存の検体を用いた全長型Lgr5陽性細胞の臨床病理学的意義の検討と細胞株を用いたシグナル解析ならびに全長型Lgr5が細胞周期に与える影響の解析を行った。Lgr5のエクソン5領域に対する抗体の性能評価として、マウス腸管上皮のフローサイトメトリーではLgr５陽性の細胞集団を特定することができた。既存の検体を用いた全長型Lgr5陽性細胞の臨床病理学的意義の検討として、ヒト大腸癌切除検体のパラフィンブロックを用いて免疫染色を行い、ヒト臨床検体における全長型Lgr5の分布形式を確認し得た。さらに化学療法前後の臨床検体の免疫組織染色を行うことで比較した結果、化学療法によって全長型Lgr5陽性細胞の比率が有意に増加することを確認しえた。同時に同細胞集団は細胞増殖のマーカーであるKi-67と一致せず、全長型Lgr5陽性細胞は細胞周期が比較的遅い細胞集団であり、細胞周期が遅いことが化学療法への抵抗生を示すメカニズムの一つではないかと推察された。細胞株を用いたシグナル解析ならびに全長型Lgr5が細胞周期に与える影響の解析として、全長型Lgr5ならびに、そのスプライシングバリアント (Lgr5Δ5) の安定強制発現系をHEK293細胞ならびにHT-29細胞を用いて作成した後、in vitroで検討を行った。全長型Lgr５を強制発現させた細胞は細胞周期が比較的緩やかに回転し、その効果はWNT3aとR-spondin-1を添加することにより増強した。さらに、抗がん剤耐性を裏打ちするために、5-FUに暴露すると、全長型Lgr5を発現させた細胞は抗がん剤耐性を獲得していることが判明した。以上より全長型Lgr5陽性細胞がいわゆる“がん幹細胞”の性質を持つ細胞集団である可能性が示唆され、同事実をBritish Journal of Cancerにsubmitし、acceptされた。

Last year's performance evaluation of Lgr5 antibody in the field of Lgr5, and the clinical use of full-length Lgr5-positive cells in existing antibodies Analysis of pathological significance of cell lines and analysis of full-length Lgr5 cell lines and analysis of effects on cell lines. Evaluation of the performance of the Lgr5 のエクソン5 domain に対する antibody 価として、Matsuhisa intestinal epitheliumフローサイトメトリーではLgr５-positive cell collection のることができた. The clinicopathological significance of using full-length Lgr5-positive cells for existing colon cancer and the resection of colon cancer patients The distribution pattern of the full-length Lgr5 was confirmed using the immunostaining method of the Fukuda Biotechnology Co., Ltd. and the clinical results of the clinical examination. We compared the results of clinical immune tissue staining before and after chemotherapy, and the ratio of full-length Lgr5-positive cells after chemotherapy was intentionally increased and confirmed. At the same time, the cell proliferation and cell proliferation of the same cell collection were consistent with Ki-67, and the cell cycle of full-length Lgr5-positive cells was compared.遅い Cell Collection 団であり, Cell Cycle がぅいことがChemotherapy へのRESISTANCE 生を Show すメカニズムの一つではないかと inspection された. The cell line was analyzed using いたシグナルならびにFull-length Lgr5がCell cycle analysis and えるshadow Hibiki's analysis of the sound, full-length Lgr5 ならびに, そのスプライシングバリアント(Lgr5Δ5) The stable compulsory strain is produced using HEK293 cells and HT-29 cells, and is then tested in vitro. The full-length Lgr５をforces the cell cycle and slows down the cell cycle, and the effect of WNT3a and R-spondin-1 is relatively strong.さらに, resistant がん-resistant ちするために, 5-FU exposed すると, full length type Lgr5 has shown that the cells are resistant and the resistance has been obtained, and the cells have been found to be clear. The properties and possibilities of the above-mentioned full-length Lgr5-positive cells and "stem cells" are shown in the "British Journal of Cancer" submission and acceptance.