休眠遺伝子インターフェロン・タウの再発現に関する研究

休眠基因干扰素tau重新表达的研究

• 批准号: 00J09461
• 负责人: 永岡 謙太郎
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J09461/
• 关键词: IFN-τ; 抗ウィルス活性; トランスフェクション; IFN-τ遺伝子発現ユニット; IP-10; ケモカイン

本研究は、反芻動物の着床前後期に胚から盛んに発現・分泌されるインターフェロン・タウ(IFN-τ)の特性を解明し、それを利用することでウィルス感染に強い家畜動物を作出することを目的としている。今年度の成果として1.IFN-τ遺伝子を様々なタイミングで発現させるための遺伝子発現ユニット(持続発現型、金属誘導型、テトラサイクリン誘導型)を構築し、MDBK細胞(ウシ腎臓由来)へ導入した。しかし、導入細胞におけるIFN-τの一過性発現(トランジェント)は確認されたが、ネオマイシン選択による導入クローンの作成が困難を極めた。MDBK細胞への過剰なIFN-τの生物活性が関係していると考えられ、既存のプロモーター制御利用によるIFN-τ発現の再現は難しいと推察された。そこで、着床期におけるIFN-τ細胞・時期特異的発現を解明し上記の研究に利用するため、IFN-τ遺伝子上流域解析、特にプロモーター領域へのメチル化の影響について検討を行った。その結果、IFN-τ遺伝子の時期特異的発現にはプロモーター領域のメチル化が関与していることが示唆された。2.反芻動物の着床期子宮内において発現が認められ、またIFN-τにより発現が誘導されるIP-10ケモカインの機能解析を行ったところ、IP-10は免疫細胞の走化性・遊走性を増加させ、インターロイキン-10(IL-10)の発現を誘導することが示された。このようなIFN-τ∇IP-10-免疫細胞遊走経路は、着床成立に必要な免疫学的変化を引き起こすものと考えられた。またこの経路は、長年不明であったIFN-τの抗ウィルス活性機序を理解する上で重要な役割を担うものと推察された。3.IP-10ケモカインのレセプターであるCXCR3が、胚のトロホブラスト細胞に発現していることが確認され子宮内IP-10により、胚の走化性・接着性が増加することが明らかとなった。このIFN-τ∇IP-10-胚の遊走・接着増加経路は、上記の免疫学的変化と共に反芻動物の着床成立に重要な役割を担うもの考えられた。

The purpose of this study was to elucidate the characteristics of IFN-τ in ruminant embryos during the post-implantation period and to explore its utilization in infected livestock. The results of this year are as follows: 1. IFN-γ gene expression system was constructed and introduced into MDBK cells. The transient expression of IFN-τ in transfected cells was confirmed to be extremely difficult to produce and select. The relationship between IFN-γ biological activity in MDBK cells and the reproduction of IFN-γ in the control of existing IFN-γ production was investigated. The above study was conducted to elucidate the time-specific occurrence of IFN-τ cells during implantation and implantation. As a result, the time-specific occurrence of IFN-γ gene is related to the development of different regions. 2. In ruminants, the expression of IFN-γ in the uterus during implantation was detected, and the expression of IFN-γ was induced. The functional analysis of IP-10 was performed. The expression of IL-10 (IL-10) was induced by the increase of migration and migration of immune cells. IFN-T-IP-10-Immune cell migration pathway, implantation establishment, immunology and other aspects of the study It is important to understand the mechanism of IFN-γ activity in the immune system. 3. IP-10 is detected in CXCR3 cells, and it is confirmed that IP-10 is detected in utero, and embryo mobility and adhesion are increased. The IFN-τ IP-10-receptor is an important factor in the development of ruminant implantation.

项目成果

Suda Y et al.: "Differentiation of Pregnant Shiba Goats using Plasma Amino Acid Concentrations and Mathematical Analysis"Journal of Reproduction and Development. Vol.48 No.5. 523-529 (2002)

Suda Y 等人：“利用血浆氨基酸浓度和数学分析区分怀孕柴山羊”生殖与发育杂志。

Nagaoka K et al.: "Regulation of trophoblast migration, apposition and initial adhesion by a chemokine, IFN-γ-inducible protein 10 kDa(IP-10), during early gestational period"Journal of Biological Chemistry. (in submission).

Nagaoka K 等人：“在妊娠早期，趋化因子 IFN-γ 诱导蛋白 10 kDa (IP-10) 对滋养层迁移、并置和初始粘附的调节”《生物化学杂志》（已提交）。

Nagaoka K et al.: "A Chemokine, IFN-γ-Inducible Protein 10 kDa(IP-10), Is Stimulated by IFN-τ and Recruits Immune Cells in the Ovine Endometrium"Biology of Reproduction. (in press). (2003)

Nagaoka K 等人：“一种趋化因子，IFN-γ 诱导蛋白 10 kDa(IP-10)，受 IFN-τ 刺激并在绵羊子宫内膜中招募免疫细胞”（正在出版）。 ）

Nojima H et al.: "Increase in DNA Methylation Down-Regulates Conceptus Interferon-tau Gene Expression"Biology of Reproduction. (in submission).

Nojima H 等人：“DNA 甲基化的增加下调受孕干扰素 tau 基因表达”生殖生物学。

Nagaoka K et al.: "Changes in Local Immunoregulation by A Chemokine, IFN-γ-Inducible Protein 10 kDa(IP-10), in the Caprine Pregnant Endometrium"American Journal of Reproductive Immunology. (in submission).

Nagaoka K 等人：“山羊妊娠子宫内膜中趋化因子 IFN-γ 诱导蛋白 10 kDa(IP-10) 的局部免疫调节变化”美国生殖免疫学杂志（已提交）。