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タンパク高発現系開発を目指したmRNA安定化機構の解明

阐明mRNA稳定机制，旨在开发高蛋白表达系统

基本信息

批准号：
17780208
负责人：
永岡謙太郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780208/
关键词：
mRNA安定性カゼイン ARE配列 HuR AUF1 RNAi 3'UTR

项目摘要

本研究は、ミルクタンパクの一つであるカゼインmRNAの安定化制御機構を解明することで、ミルク中タンパク発現系の改良を目指すものである。本年度の成果として以下に報告する。1.カゼインmRNAの高い安定性の維持には、長いpoly(A)tailと3'UTRのARE配列がタンパク複合体を介して相互作用することが必要とされる。単にカゼイン3'UTR部をルシフェラーゼレポーター発現ベクターに組み込んでも高いルシフェラーゼ活性は得られなかったが、ホルモン刺激を加えることでその活性が増加することから、カゼインmRNAの高い安定性を再現するには、泌乳期に特異的に変化するmRNA結合タンパク質の存在も考慮する必要性が示唆された。2.実際に乳腺分化過程における主要mRNA結合タンパク質(HuR、AUF1)の局在変化を解析した結果、乳腺分化に従ってAUF1タンパクの局在が細胞質から核内へ移行していることが明らかとなった。また、乳腺分化のマーカーであるカゼインmRNAの発現増加、c-mycおよびcyclin D1 mRNAの発現低下が見られた。mRNAの安定化は一般に細胞質内で機能することが知られていることから、細胞質からのAUF1タンパクの消失は、乳腺分化過程において何らかの影響を及ぼしていることが示唆された。3.RNAiノックダウン法を用いて細胞質からのAUF1タンパクの消失を再現することにより、カゼインmRNA発現増加とc-myc mRNAの発現低下の促進が見られ、逆に強制発現を行うことにより、カゼインmRNA発現低下とc-myc mRNAの発現増加が見られた。4.RNA-タンパク免疫沈降法により、AUF1タンパクのc-myc mRNAへの結合は見られたが、カゼインmRNAへの結合は認められなかった。本研究により、カゼインmRNAの安定化機構が明らかとなり、さらに乳腺分化過程においてmRNA安定化機構が細胞分化自体に重要な役割を果たす可能性を示した。今後、より本研究を発展・応用させタンパク高発現系の開発を目指していきたい。

The purpose of this study is to improve the stability of the mRNA system in order to improve the quality of the system. The results of this year's report are as follows. 1. To maintain the stability of mRNA, long poly (A) tail 3' UTRARE is equipped with the complex to introduce the interaction between each other and the necessary conditions.