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EBウイルス遺伝子EBERのアポトーシスおよびインターフェロン抵抗性に関する研究

EB病毒基因EBER的凋亡及干扰素抗性研究

基本信息

批准号：
00J60708
负责人：
南保明日香
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究において、種々のバーキットリンパ腫(BL)細胞株を用いて種々の解析を行った結果、1.EBウイルス(EBV)がウイルス感染細胞において、インターフェロン(IFN)-αが誘導するアポトーシスに対する抵抗性を賦与すること、また、2.EBVがコードする小RNA(EBER)が、IFN-αが誘導するアポトーシス抵抗性に関与する責任遺伝子であること、3.EBERはセリン/スレオニン型キナーゼPKRの活性化、さらにその基質であるeIF-2αおよびIκBαのリン酸化を阻害することによってIFN-αが誘導するアポトーシス抵抗性を示すこと、4.細胞内において、EBERがPKRと結合すること、またPKR活性の抑制にはPKRとの結合が必須であることを明らかにした。従来、EBV感染上皮細胞におけるEBV遺伝子の発現パターンは、BLと同様であることが知られている、しかしながら、上皮細胞におけるEBERの役割は明確ではない。そこで、ヒト小腸由来上皮細胞株Intestine 407細胞株をモデルとして用いて、以下に示す種々の解析を行った。第一にEBV感染クローンを構築し、この細胞株についてIFN-α処理を行い、フローサイトメトリーを用いたSubG1期アポトーシスアッセイを行った。さらに、EBER遺伝子を導入した細胞株を用いて同様の解析を行った。さらにこれらの細胞株について、EBV感染およびEBERがPKR活性化に与える影響を調べた。その結果、EBVは上皮細胞において、1.IFN-αが誘導するアポトーシスに対する抵抗性を賦与すること、また、2.EBERがIFN-αが誘導するアポトーシス抵抗性に関与する責任遺伝子であるということ、3.EBERはPKR経路を阻害することにより、IFN-αが誘導するアポトーシス抵抗性を示すことを明らかにした。

In this study, the results of BL cell lines were analyzed by using different kinds of cell lines. The results of 1.EB virus infection (EBV) were analyzed by RT-PCR, and the IFN-α genes were expressed by RT-PCR. RT-PCR was used to analyze the expression of small RNA (EBER), RNA, DNA, RNA, RNA, RNA The IFN- α gene leads to the activation of the PKR gene, the eIF-2 α gene, the I κ B α gene, the acid block, the IFN- alpha, the resistance gene, the IFN- alpha, and the resistance gene. The combination of intracellular DNA, EBER PKR, PKR, and PKR activity inhibition assay must be confirmed to be sensitive. In recent years, EBV-infected epithelial cells have been infected with EBV cells, and BL cells have been detected in the same way. The epithelial cells have been cut clearly and clearly. The epithelial cell line Intestine 407 and the cell line H407 were used for the analysis of the following samples. In the first EBV infection, the cell line was infected with IFN- α, and the cell line was infected with subG1phase. The cell lines were analyzed with the same amount of money in the same way as those in the cell lines of the mother mother and the EBER mother. The cell lines were infected with EBV, the cells were infected with EBER, PKR was activated, and the virus was infected. The results were as follows: the results of EBV, EBV, PKR, 3.EBER, IFN-α, IFN-α, IF IFN- α is sensitive to resistance and indicates that it is sensitive to stress.