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外胚葉性プラコードにおける感覚器形成を促す作用因子群の解明

阐明促进外胚层基板感觉器官形成的一组因素

基本信息

批准号：
12026206
负责人：
小林麻己人
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

眼・鼻・耳などの感覚器は、プラコードと呼ばれる肥厚化表皮外胚葉から形成される。本研究では、感覚器プラコード形成機構の分子基盤解明を目的に、感覚器プラコード特異的に発現するSix3及びSix4の遺伝子発現機構とその産物の転写因子としての生理機能の解析を行なった。Six3をゼブラフィッシュ胚で過剰発現させると眼が肥大する。Six3は転写抑制化因子Enと類似した蛋白質領域をもつことから、転写抑制化因子として機能すると予想された。実際に、強制的に転写活性化型にした変異Six3の過剰発現を行ったところ、眼縮小という野生型とは逆の表現型が観察された。Enは転写コリプレッサーGrouchoとの結合により転写抑制能を発揮するので、GrouchoとSix3の相互作用を調べるためにゼブラフィッシュGroucho遺伝子を単離した。酵母two-hybidと免疫沈降解析の結果、GrouchoとSix3は結合することが明らかとなり、また、この相互作用が喪失した変異Six3構築では眼肥大化能が消失することがわかった。以上の結果から、眼形成過程においてSix3は転写抑制化因子として機能することが明らかとなった。次にゼブラフィッシュSix3及びSix4遺伝子の上流領域を単離し、GFP遺伝子を接続したレポーター構築を作製した。この構築をゼブラフィッシュ初期胚に注入すると、それぞれ眼プラコード及び鼻・耳プラコードに特異的なGFP発光が観察された。この結果は、単離した遺伝子領域に感覚器プラコード特異的な発現を規定する遺伝子配列が含まれていることを示す。今後は、これらの配列を同定し、感覚器プラコード形成を決定する因子の解明を目指す。一方、この解析過程で鼻・耳プラコード特異的なGFP発光を示すトランスジェニックゼブラフィッシュを系統化したので、当該系統を利用してプラコードから感覚器への形成過程を詳細に調べる予定である。

The sensory organs of the eyes, nose and ears are transformed into hypertrophic epidermal ectodermal leaves. In this study, we aim to elucidate the molecular substrate of the sensor primordium formation mechanism, and analyze the physiological function of the sensor primordium formation mechanism and the product of the gene generation mechanism of Six3 and Six4. Six3 is the first time that a child has been born. Six3 is similar to the protein domain, and the function of the inhibitory factor is expected. In the case of stress, the expression of active type is different from that of wild type. The interaction between Groucho and Six3 is mediated by the interaction between Groucho and Six. Yeast two-hybid immune sedimentation analysis results, Groucho and Six 3 anti-binding, anti-eye hypertrophy, anti-eye hypertrophy. As a result of the above, the eye formation process is divided into Six parts: the inhibition factor and the function factor. The next step is to control the upstream domain of the Six3 and Six4 genes and the downstream domain of the GFP gene. The construction of the first phase of the embryo injection, all eyes and ears of the specific GFP emission detection The result is that the sensor array in the isolated sub-domain contains the following elements: In the future, the arrangement of the sensor is determined by the factor of the sensor. In one aspect, the analysis process of GFP emission is systematized, and the sensor formation process is adjusted in detail when the system is utilized.