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ゼブラフィッシュを用いた環境応答制御因子群の網羅的な探索

利用斑马鱼全面寻找环境反应控制因素

基本信息

批准号：
13202007
负责人：
小林麻己人
金额：
$ 3.01万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

異物代謝酵素群は、外来物質の体内侵入やストレス刺激により転写レベルで発現誘導される。本研究では、この制御に関与する未知因子の単離同定を目的に、ゼブラフィッシュを用いた突然変異体スクリーニングを試みることにした。具体的には、種々薬剤に対する異物代謝酵素GST-piの転写誘導が異常になる変異系統の探索である。誘導条件を検討した結果、4日齢幼魚における親電子性試薬ジエチルマレイン酸及び多環芳香族3メチルコラントレン処理がスクリーニングに適切であることがわかった。そこで、変異剤ENUを用いた突然変異体スクリーニングを開始した。現在、変異剤処理した雄魚と無処理の雌魚とを交配して得たF1世代を育成している。今後、F3胚の段階で、薬剤に対する応答能を調べる予定である。当初はF2胚で表現型を観察する一倍体スクリーニングを模索していたが、応答能の検出が4日齢以前では困難であることがわかったため、通常の二倍体スクリーニングを行うことにした。一方、上記スクリーニングではGST-piの発現を免疫染色法で調べる予定であるが、スクリーニングの簡便化・迅速化を目指し、薬物に応答して発光するトランスジェニックフィッシュの作製を試みた。まず、ゲノムDNAライブラリーをスクリーニングし、GST-pi遺伝子の翻訳開始点上流約3.5kbの予想転写制御領域を得た。次に、薬剤処理に対する応答配列がこの領域内にあるかどうかを、ゼブラフィッシュ胚を用いた一過性のGFPレポーター解析をGFPで調べた。その結果、このGST-pi駆動型GFPレポーター構築が親電子性物質にも多環芳香族にも応答することがわかった。そこで、現在、この構築をゲノムに安定にもつトランスジェニックフィッシュの系統化を進めている。今後は、得られた系統のなかからより応答性の高い系統を選択し、次世代の突然変異体スクリーニングに活用する予定である。

Foreign matter metabolizing enzyme group is induced by invasion of foreign substances and stimulation of foreign substances. This study focuses on the control and control of unknown factors and the determination of the purpose of the study. The study of the specific system of GST-PI induced by different kinds of enzymes The induction conditions were investigated as follows: 4-day-old juvenile fish were tested for electrophilicity, acid and polycyclic aromatic compounds. All of a sudden, you're in the middle of something, you're in the middle of something. Now, the male fish is treated differently and the female fish is not treated differently. In the future, F3 can be adjusted according to the stage, position and function. The first F2 phenotype was detected by a diploid gene. A method for determining the expression of GST-pi by immunostaining is described. The method is simple and rapid. The method for determining the expression of GST-pi by immunostaining is also described. About 3.5kb upstream of the translation start point of the GST-pi gene was obtained from the desired control domain. The next step is to adjust the GFP profile within the domain. As a result, the GST-pi-activated GFP complex was constructed as an electrophilic substance and a polycyclic aromatic complex. In the future, we will continue to build a stable and systematic society. In the future, the selection of high-quality systems and the use of sudden changes in the next generation will be determined.