脊椎動物の感覚器形成に関わる未知遺伝子群の探索

寻找参与脊椎动物感觉器官形成的未知基因组

• 批准号: 13045006
• 负责人: 小林 麻己人
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13045006/
• 关键词: 感覚器; Six4; トランスジェニック; セブラフィッシュ; スクリーニング; GFP

感覚器形成過程の制御機構の理解には、関与する分子の実体と機能を明らかにする必要がある。こうした分子の探索を目的に、ゼブラフィッシュを用いた突然変異体スクリーニングを試みることにした。本研究では、スクリーニングを簡便化するための工夫としての感覚器原基がGFP発光するトランスジェニックゼブラフィッシュの作製及び系統化と、この系統を基盤とした変異フィッシュのスクリーニング開始を行った。ゼブラフィッシユSix4.1は、鼻及び耳の形成領域に最も早く発現するマーカー遺伝子の一つであるが、感覚器原基が顕在化した後も発現が継続される。そこで、この発現パターンを利用することを想起し、Six4.1遺伝子ゲノムの転写制御領域を単離し、GFP遺伝子をレポーターとして融合した構築を作製した。この構築をゼブラフィッシュ初期胚に注入したところ、約3割の胚で鼻と耳の原基においてGFP発光を示した。GFP陽性の胚を成魚まで生育させ、GFPの発光を指標に次世代胚においてトランスジェニック系統の単離を試みた結果、鼻及び耳の原基が強く発光するGFPトランスジェニックフィッシュ系統を得ることに成功した。この系統における感覚器特異的なGFP発現は、4日幼魚においても観察されたので、鼻及び耳形成の予定領域から後期感覚器原基までを、生体で持続的に視覚化した系統の作製に成功できたと判断した。次に、得られたGFPフィッシユ系統を変異フィッシュのスクリーニングに活用するためにホモ体化し、大量育成した。雄成魚に対し、変異剤ENU処理を行うことにより、ゲノム遺伝子にランダムに変異を導入した。現在、変異剤処理した雄魚と無処理の雌魚とを交配して得たF1世代を育成している。今後、F3胚の段階で、GFP発光の異常を指標に、感覚器形成が異常になる変異フィッシュを探索する予定である。

The formation process of sensors, the control mechanism, the understanding of に に, the relationship with the と function of する molecules, and the を clarity of ら にする にする are necessary がある. こ う し た molecular の explore に を purpose, ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ を with い た suddenly - variant ス ク リ ー ニ ン グ を try み る こ と に し た. This study で は, ス ク リ ー ニ ン グ を easy す る た め の time と し て の device primordium 覚 が GFP 発 light す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ の system and systematic と び, こ の を base plate と し た - different フ ィ ッ シ ュ の ス ク リ ー ニ ン グ line start を っ た. ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ユ Six4.1 は, nose and ear の び formation field に も most early く 発 now す る マ ー カ ー posthumous son 伝 の a つ で あ る が, feeling 覚 primordium が 顕 in turn し た after も 発 now が 継 続 さ れ る. そ こ で, こ の 発 now パ タ ー ン を using す る こ と を remember し, Six4.1 but 伝 ゲ ノ ム の planning write suppression area を 単 from し, GFP but 伝 を レ ポ ー タ ー と し て fusion し た build を cropping し た. こ の build を ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ early embryo に injection し た と こ ろ, about 3 cut の embryo で nasal と ear の primordium に お い て GFP 発 light を shown し た. GFP positive の embryo を fish ま で fertility さ せ, GFP の 発 を indicator light に nextgen embryo に お い て ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク system の 単 from を try み た results, nose and ear の び primordium が strong く 発 light す る GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク フ ィ ッ シ ュ system was を る こ と に successful し た. こ の system に お け る device specific な 覚 GFP 発 は, 4 larval に お い て も 観 examine さ れ た の で, nose and ear び formation の designated areas か ら late device primordium 覚 ま で を, living body で hold 続 に 覚 change し た の cropping system に successful で き た と judgment し た. Time に, ら れ た GFP フ ィ ッ シ を ユ system - different フ ィ ッ シ ュ の ス ク リ ー ニ ン グ に use す る た め に ホ モ body し, a large number of breeding し た. Male fish に し seaborne, - different tonic emu line 処 reason を う こ と に よ り, ゲ ノ ム posthumous son 伝 に ラ ン ダ ム に - different を import し た. Now, with the treatment of the mutation agent, the <s:1> male fish と has no treatment and the female fish とを mate. The <s:1> て results in a たF1 generation of を breeding, resulting in the <s:1> て る る る る る. In the future, the F3 embryos の Duan Jie で, GFP 発 light の anomaly を に, device forming abnormal が 覚 に な る - different フ ィ ッ シ ュ を explore す る designated で あ る.

项目成果

Kajihara,M.: "Isolation, characterization, and expression analysis of zebrafish large Mafs."J.Biochem.. 129. 139-146 (2001)

Kajihara,M.：“斑马鱼大型 Maf 的分离、表征和表达分析。”J.Biochem.. 129. 139-146 (2001)

Kobayashi, M.: "The homeobox protein Six3 interacts with the Groucho corepressor and acts as a transcriptional repressor in eye and forebrain formation"Dev. Biol.. 232. 315-326 (2001)

Kobayashi, M.：“同源框蛋白 Six3 与 Groucho 辅阻遏物相互作用，并在眼睛和前脑形成中充当转录阻遏物”Dev.

Kobayashi, M.: "Hematopoietic regulatory domain of gatal gene is positively regulated by GATA1 protein in zebrafish embryos"Development. 128. 2341-2350 (2001)

Kobayashi, M.：“斑马鱼胚胎中gatal基因的造血调节域受到GATA1蛋白的正向调节”开发。

Kobayashi, D.: "Early subdivisions in the neural plate define distinct competence forinductive signals"Development. 129. 83-93 (2002)

Kobayashi, D.：“神经板的早期细分定义了感应信号的不同能力”的发展。