マイコプラズマ滑走運動を担うモータータンパク質のクローニング

负责支原体滑行运动的运动蛋白的克隆

• 批准号: 12030220
• 负责人: 中村 太郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12030220/
• 关键词: マイコプラズマ; 滑走運動; 変異株; 接着タンパク質; フリーズフラクチャー; 力-速度関係; エネルギー源; 膜電位

(1)ガラス上を滑走しているマイコプラズマを瞬間凍結し、フリーズフラクチャー法を用いた電子顕微鏡観察を行った。駆動力が発生しているように見られる首の部分に、長さ30-50nm、直径5nmのスパイクが膜内部の球状の構造から外部へ突き出し、他の端がガラスに張り付いていることが明らかになった。(2)変異株m13で欠失しているタンパク質を同定し、その遺伝子の構造を決定した。このタンパク質は2ヶ所の膜貫通領域を持つ約350kDaの巨大タンパク質で、変異株ではN末端から3分の1の位置にナンセンス変異が入っていた。このタンパク質を認識するモノクローナル抗体は滑走時のガラスへの結合を阻害した。またこの抗体を用いた蛍光抗体染色では、首の部分が認識された。(3)マイコプラズマの尾部にビーズをつけ、培地のフローとレーザートラップを用いて力-速度関係を測定した。速度は力が増大するに従って直線状に減少した。ストール時の力は26-28ピコニュートンで、ミオシンやキネシンの5-7倍であった。(4)細胞がATPが枯渇して滑走ができなくなった状態で、人為的に膜電位を形成させると滑走が回復することを明らかにした。このことは滑走がATPよりも膜電位に依存することを示している。

(1)The electronic microscope is used to detect the temperature of the liquid crystal. The first part of the film is 30-50nm long and 5nm in diameter. The spherical structure inside the film is protruded from the outside and the other end is stretched. (2)The structure of the plant m13 is determined by the same quality and structure. The membrane penetration domain of the two species is about 350kDa, and the N-terminal is 3 minutes away from the first site. This is the first time that the antibody has been detected. The first part of the antibody was recognized by light antibody staining. (3)The relationship between force and velocity was determined. Speed increases and force decreases linearly. 26-28 ° C, 5-7 ° C (4)Cell ATP is in a state of decline, man-made membrane potential is formed, slip away and return to normal. The membrane potential is dependent on ATP.

项目成果

Seto S,Layh-Schmitt G,Kenri T,Miyata M: "Visualization of the attachment Organelle and Cytadherence Proteins of Mycoplasma pneumoniae by immunofluorescence microscopy"Journal of Bacteriology. 183(5). 1621-1630 (2001)

Seto S、Layh-Schmitt G、Kenri T、Miyata M：“通过免疫荧光显微镜观察肺炎支原体附着细胞器和细胞粘附蛋白”细菌学杂志。

Miyata M,Yamamoto H,Shimizu T,Uenoyam A,Citti C,Rosengarten R: "Gliding mutants of Mycoplasma mobile : relationship between motility and cell morphorogy, Cell adhesion and microcology formation"Microbiology. 146(P+6). 1311-20 (2000)

Miyata M，Yamamoto H，Shimizu T，Uenoyam A，Citti C，Rosengarten R：“移动支原体的滑动突变体：运动与细胞形态、细胞粘附和微生物形成之间的关系”微生物学。