胞子形成時にシンタキシンの劇的な細胞内移動を引き起こさせる分子機構の解明

阐明孢子形成过程中突触融合蛋白在细胞内剧烈运动的分子机制

基本信息

批准号：
15032251
负责人：
中村太郎
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

分裂酵母のシンタキシンPsy1は栄養増殖には細胞膜に局在するが、胞子形成時になると、将来胞子の細胞膜となる前胞子膜に劇的に局在変化する。本研究はこの局在変化の分子機構を明らかにすることを目的とする。Psy1の局在変化の分子メカニズムを調べることは単に1タンパク質の局在変化ではなく、シンタキシンはターゲット膜を規定するタンパク質なので、膜小胞輸送の方向を変化されるメカニズムとしてもとらえることができる。Psy1が細胞内に取り込まれるのはエンドサイトーシスの系による可能性が高いと考えられるので、エンドサイトーシス追跡蛍光試薬FM4-64とGFP-Psy1の動きをタイムラプス観察したところ、両者の局在は一致した。また、胞子形成欠損株の中でPsy1の局在変化がみられないものをスクリーニングしたところ、1型ミオシンMyo1の欠損株が、目的の形質を示すことがわかった。また、栄養増殖時に胞子形成特異的転写因子Mei4を強制発現させると、Psy1の局在変化は誘導できることが知られているが、Myo1とSec9(PSy1とともにt-SNARE複合体を構成)を同時に強制発現しても栄養増殖においてもPsy1の局在変化をおこすことができた。sec9^+の発現誘導は一部Mei4に依存しているので、Myo1とSec9がPsy1の局在変化を制御する重要な因子であることがわかった。また、Myo1欠損株ではエンドサイトーシスが欠損していた。以上のことから、Psy1はエンドサイトーシスの系を用いて細胞内に取り込まれ、その過程には1型ミオシンが非常に重要な働きをしていることが明らかになった。

裂变酵母中的语法PSY1在营养生长过程中位于细胞膜上，但是当形成孢子时，它会急剧变化为前膜，这将在未来成为孢子的细胞膜。这项研究旨在阐明这种定位变化的分子机制。检查PSY1定位变化的分子机制不仅是蛋白质的定位变化，而且由于语法素是一种定义靶膜的蛋白质，因此可以将其视为一种机制，通过该机制，膜囊泡转运的方向更改。由于内吞作用系统可能会在细胞中吸收PSY1，因此当内吞作用跟踪荧光试剂FM4-64和GFP-PSY1的运动在及时的情况下观察到时，两者的定位都是一致的。此外，当筛选未在孢子缺陷中表现出PSY1的菌株的筛查时，发现缺乏1型肌球蛋白肌球蛋白肌球蛋白肌球蛋白的菌株表现出所需的性状。此外，众所周知，在植物生长过程中，孢子孢子的特异性转录因子MEI4强迫表达可能诱导PSY1中的定位变化，但是即使MyO1和Sec9（组成构成T-Snare复合物与PSY1一起），PSY1的定位变化也可能在植物生长过程中发生。由于Sec9^+表达的诱导部分取决于MEI4，因此发现MyO1和Sec9是控制PSY1中局部变化的重要因素。此外，内吞作用缺乏Myo1缺陷菌株。从上面可以揭示出使用内吞作用系统将PSY1吸收到细胞中，而该型肌球蛋白在此过程中起着非常重要的作用。