植物の細胞分裂の制御機構

植物细胞分裂的控制机制

• 批准号: 12037213
• 负责人: 関根 政実
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12037213/
• 关键词: 細胞周期; サイクリンD; Rb; 細胞内局在性; タンパク質安定性; 誘導発現系

(1)タバコサイクリンD遺伝子のプロモーター領域にGUS(β-glucuronidase)を連結してタバコ植物で形質転換体を作出した結果、GUSの組織染色により根端や側根の分裂組織で発現が見られ、プロモーター領域に分裂組織での発現に必要なシス因子が含まれることが示された。(2)タバコサイクリンDにGFP(green fluorescent protein)を融合させて、CaMV35Sプロモーター制御下で形質転換BY-2細胞を作出し、細胞内局在性を解析した。野生型との融合GFPは主に核に局在したが、191番目のスレオニンをアラニンに置換した変異体(T191A)では主に細胞質に局在した。次に、グルココルチコイド誘導発現系を構築し、dexamethasone処理により誘導発現させて洗浄後のタンパク質の安定性を解析した結果、296および300番目のセリンをアラニンに置換した変異体(S296,300A)では野生型より安定だが、T191Aでは野生型よりも安定性が低下していた。またS296,300Aの誘導発現により細胞の増殖速度が顕著に速くなることが分かった。(3)グルココルチコイド誘導発現系によりタバコRbのすべてのリン酸化部位をアラニンに置換した変異体を形質転換したBY-2細胞を作出した結果、dexamethasone処理によるタバコRbの誘導発現によって細胞の増殖が遅くなった。また、タバコRbに対する特異抗体を精製してWestern解析した結果、BY-2細胞の増殖期では約113kDaにバンドが検出されたが増殖停止期では検出されなかった。mRNAは常にほぼ同程度存在することから、タバコRbタンパク質は転写後に発現制御されることが示唆された。(4)BY-2細胞を用いた一過性の発現解析により、量依存的なタバコRbによるE2Fの転写活性化の抑制を支持する結果が得られた。

(1)GUS(β-glucuronidase) is a link between the GUS gene and the plant in the field. GUS staining is used to detect the root tip and lateral root division tissue. The necessary factors for the development of the division tissue in the field are shown. (2)GFP(green fluorescent protein) fusion, CaMV35S fusion control, BY-2 cell transformation, cellular localization analysis. wild-type GFP fusion is carried out in the cytoplasm of the host cell. In addition, the stability analysis results of induction and development after washing were analyzed. The results showed that the stability of wild type and T191A was lower in 296 and 300A than in wild type and in 300A than in 300A. The induction of S296, 300A increases the growth rate of cells. (3)The expression of Rb was detected BY PCR. The expression of Rb was detected by PCR. The specific antibody against BY-2 cells was purified and analyzed by Western analysis. The growth period of BY-2 cells was about 113kDa. mRNA is always present at the same level, and the expression of mRNA is controlled after it is written. (4)By-2 cells in the use of transient expression analysis, quantitative dependence of Rb, E2F and the inhibition of transcription activity were supported by the results.

项目成果

Nakano,Y.,Steward,N.,Sekine,M.,Kusano,T.and Sano,H.: "A Tobacco NtMET1 cDNA Encoding a DNA Methyltransferase : Molecular Characterization and Abnormal Phenotypes of Transgenic Tobacco Plants."Plant & Cell Physiol.. 41. 448-457 (2000)

Nakano,Y.、Steward,N.、Sekine,M.、Kusano,T. 和 Sano,H.：“编码 DNA 甲基转移酶的烟草 NtMET1 cDNA：转基因烟草植物的分子特征和异常表型。”植物

Nagawa,S.,Nakai,Y.,Kato,K.,Sekine,M.,Yoshida,K.and Shinmyo,A.: "Isolation of Growth-Phase-Spectific Promoters from Cultured Tobacco Cells."Journal of Bioscience and Bioengineering. 89. 231-235 (2000)

Nakawa,S.、Nakai,Y.、Kato,K.、Sekine,M.、Yoshida,K. 和 Shinmyo,A.：“从培养的烟草细胞中分离生长阶段特异性启动子。”生物科学与生物工程杂志

Chaboute,M.-E.,Clement,B.,Sekine,M.,Philipps,G.and Chaubet-Gigot,N.: "Cell Cycle Regulation of the Tobacco Ribonucleotide Reductase Small Subunit Gene is Mediated by E2F-like Elements."Plant Cell. 12. 1987-2000 (2000)

Chaboute,M.-E.、Clement,B.、Sekine,M.、Philipps,G. 和 Chaubet-Gigot,N.：“烟草核糖核苷酸还原酶小亚基基因的细胞周期调节是由 E2F 样元件介导的。

関根政実: "植物細胞工学シリーズ13植物細胞の分裂-分裂装置とその制御機構-「G1/S移行期の制御機構」"秀潤社. 11 (2000)

关根正美：“植物细胞工程学丛书13植物细胞分裂-分裂机械及其控制机制-‘G1/S过渡期的控制机制’”《植物细胞学》11（2000）。