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倍数性コムギの比較ゲノム解析

多倍体小麦的比较基因组分析

基本信息

批准号：
12202045
负责人：
荻原保成
金额：
--
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

6倍体のコムギから効率よく遺伝子をクローニングするシステムを確立した。高分子DNAを挿入したパンコムギのゲノミックライブラリーを構築し、3種類のゲノムに相当する標的遺伝子のゲノミッククローンをスクリーニングした:P1ファージ由来のクローニングベクターを改良し、アグロバクテリウムの系を用いてイネ科植物を直接形質転換できるTAC(Transformation-competent Artificial Chromosome)ベクターを開発した。パンコムギから高分子DNAを単離し、高分子DNAを制限酵素HindIIIで部分分解し、パルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)で分画した。分画したDNAをTACベクターにライゲーションし、エレクトロポーレーターで大腸菌を形質転換した。形質転換したコロニーを回収し、数百コロニーをまとめてタイタープレートのウェルに入れ、ライブラリーとして冷凍保存した。各ウェルからプラスミドDNAを抽出し、各ウェルのプラスミドDNAをプールしてタイタープレート1枚にまとめてスクリーニングプレートを作製した。このライブラリーから、シングルコピーの遺伝子をスクリーニングした。A,B,Dそれぞれのゲノムに相当するクローンを得ることができ、TACライブラリーの妥当性が示せた。次年度からは、TACライブラリーを用いて各種遺伝子のポジショナルクローニング・ゲノム歩行に活用したい。

The efficiency of the hexaploid のコムギから has been established. Polymer DNA insertion and construction, 3 types of construction P1ファージ origin of the のクローニングベクターを Improvement し, アグロバクテリウムの线を用いてイネKozo Transformation-competent TAC (transformation-competent) Artificial Chromosome)ベクターを开発した.パンコムギからpolymer DNA is isolated, polymer DNA is partially decomposed by restriction enzyme HindIII, and PFGE is used for separation. Separate drawings include したDNA をTAC ベクターにライゲーションし and エレクトロポーレーターで coliform morphological change した. The shape of the material is changed and recycled, and hundreds of コロニーをまとめてタイタープレートのウェルに入れ、ライブラリーとしてfrozen preservationした. Each ウェルからプラスミドDNA extractor, each ウェルのプラスミドDNAをプールしてタイタープレート1 piece of にまとめてスクリーニングプレートをした.このライブラリーから、シングルコピーの伝子をスクリーニングした. A,B,D それぞれのゲノムにequivalent するクローンをget ることができ,TACライブラリーのappropriateness shows せた. In the following year, various left-behind items such as TAC ライブラリーをいて are used.