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染色体位置情報を利用した直接的有用遺伝子単離法の開発

利用染色体位置信息开发直接有用基因分离方法

基本信息

批准号：
09876002
负责人：
荻原保成
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09876002/
关键词：
AFLP100法遺伝子発現マップベースクローニングコムギフィンガープリンティング染色体部分欠乏系統ノーザンブロットサザンブロット解析 AMF法 PCR CPNA 穂の形態形成染色体部分欠失系統遺伝地図形質転換

项目摘要

コムギにおける染色体位置情報に基づいた直接的遺伝子単離法の確立のため、(1)コムギの穂の形態を制御するQ遺伝子、(2)T.timophceviの細胞質雄性不稔を回復するRf3遺伝子、(3)Aegilops crassaの日長感応性細胞質雄性不稔を回復するRfd1遺伝子をそれぞれコムギ染色体上、5AL,1BS,7BLにRFLPマーカーを用いて詳細にマッピングした。QとRfd1遺伝子にターゲットを絞った。Q遺伝子は5AL上、Xcdo1168から4.8cM,Xpsr370から4.1cMの位置にマッピングした。マッピングした遺伝地図と染色体部分欠失系統を用いた細胞学的地図を共通したDNAマーカーで構築し、両者を対応付け、コムギ染色体上でのDNAマーカーの座乗領域を明らかにした。さらに、Q遺伝子が欠失している5ALに関する染色体部分欠失系統q5と正常系統の穂の原基が形成される幼穂から全RNAを抽出した。Poly(A)^+RNAを抽出し、2重鎖cDNAを合成した。cDNAをTaqIで消化し、アダプターを連結し、PCRにより正常系統特異的mRNAを選抜した(Amplified Fragment Length Polymorphism(AFLP)-based mRNA Fingerprinting)。正常系統特異的cDNAをプラスミドベクターにクローニングした。都合、84種類の正常系統特異的クローンかえられた。これらのクローンのノーザンプロット解析により組織特異的発現を確認した結果、候補クローンを26に絞り込んだ。さらに、これらのクローンを(1)DNAシークエンスを決定した、(2)サザンハイブリダイゼーションにより、マッピングした結果、Q遺伝子と組み換え価0のものを2クローン選抜した。これらのクローンをコムギに形質転換し、目的遺伝子であることを確かめたい。同様にして、Rfd1遺伝子の候補クローン22をえた。これらのクローンを特徴つけ目的の遺伝子をクローニングしたい。

The chromosome position information is included in the direct gene isolation method,(1) the chromosome morphology control Q gene,(2) the cytoplasmic male sterility recovery Rf3 gene of T.timophcevi,(3) the cytoplasmic male sterility recovery Rfd1 gene of Aegilops crassa,(5) AL,1BS, 7BL RFLP, and the detailed gene analysis. Q. Rfd. 1. Q: 5AL, Xcdo1168, Xpsr370, 4.1cM The DNA sequence on chromosomes was identified in the DNA sequence of cytology. The chromosome partial deletion system q5 and the chromosome primordium formation system q5 were isolated from the chromosome partial deletion system q5 and the chromosome partial deletion system q5. Poly(A)^+RNA extraction, 2-fold cDNA synthesis cDNA digestion, PCR, Amplified Fragment Length Polymorphism(AFLP)-based mRNA Fingerprinting Normal system-specific cDNAs may be used to detect the presence of DNA. Tohe, 84 kinds of normal system-specific cru The results of the analysis of tissue specific occurrences are confirmed, and candidates are included in the analysis. (1)DNA identification;(2) DNA identification;(3)DNA identification;(4)DNA identification;(5) DNA identification;(6) DNA identification;(7) DNA identification;(8) DNA identification;(9) DNA identification;(9) DNA identification;(10) DNA identification;(11) DNA identification;(12) DNA identification;(13) DNA identification;(14) DNA identification;(15) DNA identification;(16) DNA identification;(17) DNA identification;(18) DNA identification;(19) DNA identification;( This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. The same is true for Rfd1 and Rfd 2. This is the first time I've ever seen a woman.