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ゲノム恒常性維持機構におけるWRNヘリケースの役割

WRN解旋酶在基因组稳态维持机制中的作用

基本信息

批准号：
12213110
负责人：
児玉靖司
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝的早老症Werner症候群(WS)は、ゲノム不安定性を示し、高発がん性である。その原因遺伝子であるWRNは、RecQ型ヘリケースをコードしている。しかし、WRNヘリケースの細胞内での生理的機能や、その機能欠損がなぜゲノム不安定性を誘起し、老化と発がん性を亢進させるのかについては未解明である。そこで本研究は、WRNヘリケースの機能欠損が、どの様にしてゲノム不安定性を誘起するのかを明らかにするために行った。WS細胞は、4-ニトロキノリン1-オキシド(4NQO)に対して高感受性を示す。このWS細胞にみられる4NQO高感受性は、8番染色体移入によるWRNヘリケースの発現では相補されないが、正常細胞との雑種細胞では正常化された。すなわち、WS細胞では、WRNヘリケースの機能欠損にリンクして、二次的な変異が4NQOによるDNA付加体の修復機構に生じていることが明らかになった。さらに、WS細胞のゲノム不安定性誘発機構を探るために、WS細胞を用いてX線誘発遺伝子突然変異頻度を調べた。その結果、WS細胞は特に低線量域(1Gy程度)において、対照細胞よりも約8倍程突然変異頻度が高くなることが分かった。その原因を明らかにするために、.制限酵素で切断したプラスミドDNAを、細胞粗抽出液中で修復させる試験管内DNA切断再結合実験を行った。その結果、WS細胞の粗抽出液中で反応させると、再結合の正確性が低下する傾向がみられることが分かった。これらの結果は、WRNヘリケースが、DNA鎖切断修復の正確性を制御することで、ゲノム安定性の維持に寄与していることを示唆している。

Werner's Syndrome (WS), the progeria of the elderly, is not stable, and is characterized by high-risk symptoms.そのCause であるWRNは, RecQ type ヘリケースをコードしている.しかし、WRNヘリケースのphysiological function inside the cell や、そのfunctional impairment がなぜゲノIt is caused by instability, aging, and hypersexuality. It is not clear yet.そこで本研究は、WRNヘリケースの Functional impairmentが、どの様にしてゲノムInstabilityをinducedするのかを明らかにするために行った. WS cells are highly susceptible to 4-NQO (4NQO).このWS cells にみられる4NQO high sensitivity は、Chromosome 8 transferred into によるWRNヘThe normal cells and the normal cells are normalized.すなわち, WS cell では, WRN ヘリケースの functional impairment にリンクして, secondary な変Iso 4NQO DNA plus body repair mechanism に生じていることが明らかになった.さらに, WS cell instability induction mechanism をExploration るために, WS cells いてAs a result, the WS cell has a special low dose domain (1Gy level), and the ES cell has a sudden change frequency of about 8 times, and the frequency is high and the level is high.そのcause を明らかにするために, restriction enzyme でcutting したプラスミドDNAを, repairing させる in the cell crude extract, DNA cutting and combining in the test tube 実験を行った. As a result, the reaction in the WS cell crude extract was low, and the recombination accuracy was low, and the tendency was to separate the cells.これらのRESULTは、WRNヘリケースが、DNA lock cutting and repairing のcorrectness system The することで, the stability of the ゲノムmaintenance of the stability and the していることをshows the している.