組み換え修復に及ぼすp53蛋白質の機能に関する研究

p53蛋白重组修复功能研究

• 批准号: 12213123
• 负责人: 瀬川 薫
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213123/
• 关键词: p53蛋白質; Rad51蛋白質; Rad52蛋白質; 組み換え修復

1、精製したRad51、Rad52蛋白質は、野生型およびN末端を欠失させたΔNN変異p53蛋白質のDNA鎖交換活性、DNAアニーリング活性を量依存性に阻害した。また、ΔNN変異p53蛋白質は、Rad52のRPA依存性のDNAアニーリング活性を同様に阻害した。これらの結果より、p53蛋白質が組み換え修復反応を担うRad蛋白質の機能の一部を抑制できる可能性が示唆された。転写活性化ドメインを欠失させた変異株でも同様な結果が得られたことより、転写の活性化や抑制化を介さずp53蛋白質は、Rad蛋白質の機能を制御できることも示唆された。予備的実験では、p53のC末端領域が関与していることを示す結果が得られている。現在、p53蛋白質が、組み換え修復を担う複合体(repairsome)中に存在しているかどうか解析中である。2、MMS処理後の生存率は、野生型酵母では未処理の対照とほぼ同じであったが、Rad51変異株では1/10,000以下に減少した。Rad51変異株に、Gal1-Gal10プロモーターに連結した野生型およびΔNN変異p53遺伝子を導入し、MMS処理後の生存率を測定した。ガラクトース培地で増殖させ、野生型p53遺伝子を発現させた場合のMMS処理後の生存率は、グルコース培地で増殖させた対照に比較し、約7倍上昇した。また、ΔNN変異p53遺伝子を発現させた場合は、約20倍上昇することが判明した。これらの結果は、ヒトp53蛋白質が酵母の組み換え修復反応の欠損を機能的に相補できることを示唆する。p53蛋白質は、多量体を形成しDNAを覆うように結合することはできないことから、直接Rad51蛋白質の機能を代行できるとは考えにくい。ΔNN変異p53遺伝子の発現によって、野生型よりも高い生存率が観察されたため、p53蛋白質の転写活性化能以外の機能の関与が示唆された。現在、p53蛋白質の機能的サプレションに非相同末端結合(non-homologous end joining)が関与してい可能性を検討中である。

1. The purified Rad51 and Rad52 proteins were inhibited in a dose-dependent manner by DNA lock exchange activity and DNA deletion activity of the mutant p53 protein. In addition, ΔNN and p53 proteins are also involved in the inhibition of RPA-dependent DNA fragmentation activity. The results showed that the p53 protein could be reorganized and reconditioned to inhibit part of the function of the Rad protein. The results showed that the activation and inhibition of p53 protein and Rad protein could be controlled by the enzyme. The results of the preparation of the p53 C-terminal field are shown in the table below. Now, p53 protein is present in some repair complexes. 2. The survival rate of wild type yeast after MMS treatment decreased by less than 1/10,000 Wild-type and ΔNN mutant p53 genes were introduced into the Rad51 mutant and Gal1-Gal10 mutant links, and the survival rate after MMS treatment was measured. The survival rate after MMS treatment increased about 7-fold compared with that of wild type p53 gene in culture. The difference between ΔNN and p53 is about 20 times higher. The results showed that the protein p53 was complementary to the function of yeast in protein replacement and repair. The p53 protein forms a complex DNA binding domain, and the p51 protein functions directly. High survival rate of mutant p53 gene was observed in the wild type and mutant p53 gene. Now, the function of p53 protein is under discussion, including the possibility of non-homologous end joining.

项目成果

瀬川薫: "p53とDNA修復"血液・腫瘍科. 41・4. 319-326 (2000)

濑川薰：“p53 和 DNA 修复”，血液肿瘤学 41・4（2000 年）。