肝臓幹様細胞の再生能を利用した肝癌に対する細胞移植治療法の開発

利用肝干细胞样细胞的再生能力开发肝癌细胞移植疗法

• 批准号: 12217018
• 负责人: 寺田 邦彦
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217018/
• 关键词: 肝癌; 細胞移植; 肝臓幹様細胞; 肝再生; コラーゲン; LECラット

[目的]本研究では、(1)代表者らが確立した方法によって肝臓から分離した正常な機能・増殖能を保持していると考えられる幹様細胞を移植に適した形態に加工し、(2)癌の根治切除後にこの幹様細胞を移植することによって肝臓の再生を促し、肝癌の治癒率を向上させることを目的としている。[成果]1.健常SDラット肝臓から増殖可能な幹様細胞と思われる細胞を分離・培養することができた。この幹様細胞にGFP遺伝子を導入することによって、GFPを核内に安定的に発現している細胞株を樹立することができた。2.この幹様細胞は、アルブミンやサイトケラチン18および19など成熟細胞のマーカー蛋白を発現しておらず、α-フェトプロテインを発現していたことから、未分化な細胞であることがわかった。3.この細胞をコラーゲンゲル内で培養したり、スフェロイドを形成させることによって、アルブミンを発現する細胞に分化誘導することができた。しかし、今回用いた培養条件下では、幹様細胞の胆管系細胞への分化は起こらず、このためには他の培養条件あるいは因子が必要であると思われた。4.移植を行う対象として、ウィルソン病のモデル動物で、肝炎および肝癌を自然発症するLECラットを用いた。移植をし易くするため、スフェロイド化した幹様細胞をコラーゲンスポンジ内で培養し、これを50%肝切除を行った若年期LECラットの腹腔内に移植した。移植後6週で、コラーゲンスポンジ内にアルブミンを発現する細胞の生着が観察された。また、移植後9週から血中へのホロ型セルロプラスミンの分泌が認められ、LECラットにおける肝臓内銅代謝が改善された。これらのことは、移植された幹様細胞が肝細胞として機能していることを示しており、幹様細胞を利用した細胞移植治療の有効性を明らかにできた。これまでところ、移植後3ヶ月までの経過しか観察できていないが、現在長期の観察を行っており、発癌抑制についても検討する。今回使用したLECラットは肝癌発症前のものであったが、今後は肝癌を発症したラットに移植を行い、癌治療に対する幹様細胞移植の効果を検討する予定である。また、コラーゲンスポンジ内で培養した幹様細胞を移植に用いるだけでなく、体外補助肝臓として利用することも考慮している。

[Objective] This study aims to: (1) establish a representative method for liver isolation, normal function, reproductive ability, and examination of stem cell transplantation, morphology, and processing;(2) promote liver regeneration, and improve the cure rate of liver cancer after radical resection. [Results]1. Normal SD cells can be isolated and cultured from stem cells. The GFP gene was introduced into the stem cells, and the GFP gene was stable in the nucleus. 2. The stem cells are divided into two groups: mature cells, mature cells and undifferentiated cells. 3. Cell differentiation is induced by cell culture, cell culture and cell differentiation. The differentiation of stem cells and bile duct cells under culture conditions is necessary. 4. Transplantation is a natural disease in animals, hepatitis, and liver cancer. Transplantation of stem cells into the abdominal cavity after 50% hepatectomy At 6 weeks after transplantation, cell growth was observed in the absence of cell growth. 9 weeks after transplantation, copper metabolism in liver was improved. Stem cell transplantation is an effective way to treat liver disease. This is the first time that cancer has been detected in the past three months after transplantation. The use of LEC technology this time will be used before the onset of liver cancer, and in the future, it will be used for transplantation before the onset of liver cancer, and the effectiveness of stem cell transplantation for cancer treatment will be discussed. The use of stem cells in vitro and in vitro is considered.

项目成果

Harada M, et al.: "Role of ATP7B in Biliary Copper Excretion in a Human Hepatoma Cell Line and Normal Rat Hepatocytes"Gastroenterology. 118. 921-928 (2000)

Harada M 等人：“ATP7B 在人肝癌细胞系和正常大鼠肝细胞胆汁铜排泄中的作用”胃肠病学。

Terada K, et al.: "Intracellular copper transport and ATP7B, the Wilson's disease protein. in "Handbook of copper pharmacology and toxicology" (Massaro EJ, ed.)"Humana Press(in press). (2001)

Terada K 等人：“细胞内铜转运和 ATP7B，威尔逊氏病蛋白。”《铜药理学和毒理学手册》（Massaro EJ，编辑）“Humana Press（正在出版）。

寺田邦彦、他: "肝幹細胞を利用した肝組織の再構成"医学のあゆみ. 196. 383-386 (2001)

Kunihiko Terada 等人：“利用肝干细胞重建肝组织”医学史 196. 383-386 (2001)。

寺田邦彦 他.: "肝・毛幹細胞 化学フロンティア(3)「再生医療工学」"化学同人(印刷中). (2001)

寺田邦彦等：“肝/毛发干细胞化学前沿（3）‘再生医学工程’”化学同人（出版中）。

Harada M, et al.: "A Mutation of Wilson's Disease Protein,ATP7B,Is Degraded in the Proteasomes and Forms Protein Aggregates"Gastroenterology. 120. 967-974 (2001)

Harada M 等人：“威尔逊氏病蛋白 ATP7B 的突变在蛋白酶体中被降解并形成蛋白聚集体”胃肠病学。