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肝臓幹様細胞の分化能を利用した肝癌のex vivo遺伝子治療

利用肝干样细胞的分化潜力进行肝癌离体基因治疗

基本信息

批准号：
11140210
负责人：
寺田邦彦
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140210/
关键词：
肝癌肝臓幹様細胞 ex vivo遺伝子治療細胞移植肝再生

项目摘要

[目的]当教室では、LECラットの肝臓から卵形細胞(oval cell)を分離することに成功し、この未分化な卵形細胞を正常肝臓に移植すると、肝細胞に分化することを見出した。そこで本研究では、肝臓幹様細胞(stem-like cell)の1つと考えられるこの卵形細胞に特定の遺伝子を導入した後、ex vivoに肝癌の肝臓に細胞移植し、遺伝子導入した卵形細胞が正常な肝細胞に分化することにより、肝癌で失われた肝臓機能の再生を図ることを目的とした。肝臓幹様細胞の分化能を利用した肝臓指向性遺伝子デリバリーシステムの開発を目指した。[研究成果]LECラットの肝臓から卵形細胞(oval cell)を分離するのと同様に、健常ラットからパーコール密度勾配遠心法を用いて肝臓幹様細胞と思われる未分化な細胞の分離・培養に成功した。この細胞は、α-フェトプロテインが陽性で、成熟肝細胞のマーカーであるアルブミン、トランスフェリン、α1-アンチトリプシンは陰性であった。また、この細胞にGFP遺伝子を導入することによって、GFPを安定的に発現している細胞株を得ることができた。GFP標識された細胞(5×10^6個)を50%肝切除後のラット肝臓あるいは脾臓に直接移植することによって、in vivoにおけるこの細胞の増殖能あるいは分化能を検討し、肝機能の再生を図ったが、細胞の生着が認められず期待された結果を得ることができなかった。移植した幹様細胞が生着しなかった理由として、細胞を調製する際にトリプシンを用いて完全に分散させたものを注入したために肝臓内に生着することができなかったことが考えられた。そこで現在、この幹様細胞を、ゲル状あるいはシート状にしたI型コラーゲンとともに培養することによって移植に適した形態に加工し、肝臓内に生着し易くすることを試みている。

[Objective] When LEC cells were isolated from liver, ovoid cells were successfully transplanted into normal liver, and liver cells were differentiated. This study aims to investigate the role of stem like cell in liver cancer, especially ovoid cell, in the regeneration of liver function. The development of liver stem cell differentiation is indicated by the use of liver directed gene expression. [Results]LEC stem cells isolated from ovoid cells were successfully isolated and cultured using a density matching method. The cells are positive, the mature liver cells are negative, and the cells are negative. The GFP gene was introduced into the cells, and the GFP gene was stably expressed in the cells. GFP labeled cells (5×10^6 cells) were transplanted directly into the liver after 50% hepatectomy. The proliferation of these cells in vivo was evaluated for differentiation, regeneration of liver function, recognition of cell growth and expected results. The stem cells were injected into the liver. The stem cells were transplanted into the liver, and the cells were cultured in the liver.