骨髄からの肝幹細胞の分離と小児代謝性肝疾患に対する細胞移植治療

骨髓肝干细胞分离及细胞移植治疗小儿代谢性肝病

• 批准号: 15591082
• 负责人: 寺田 邦彦
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15591082/
• 关键词: 骨髄; 肝幹細胞; パーコール密度勾配遠心; 代謝性肝疾患; 細胞移植; 細胞分化

[目的]肝移植に代わる治療法として細胞移植治療が考慮されている。最近、骨髄細胞中に肝細胞に分化できる幹細胞が存在することが報告されているが、肝細胞に分化可能な骨髄細胞の数は非常に少なく、このような細胞を分離するには大規模な設備が必要である。そこで、本研究では以下の二つを目的とした。(1)申請者らがこれまでに確立してきた肝臓から肝幹細胞を分離する方法を発展させ、骨髄細胞より多分化能を保持した肝幹細胞を効果的に分離できる方法を開発する。(2)分離した肝幹細胞が短期間で増殖できる条件を見つけだし、さらに組織工学的手法を応用して移植に適した状態に加工し、小児代謝性肝疾患に対して充分な治療効果が期待できる幹細胞移植法を確立する。昨年度の研究から、骨髄細胞中にはアルブミンを発現する肝細胞の性質を持った細胞に分化可能な細胞が存在し、これをin vitroで培養できることがわかった。今年度はさらに、肝細胞以外の肝臓構成細胞に分化できる細胞が骨髄中に存在するか否かを検討した。[方法]健常ラット大腿骨より骨髄細胞を採取後、パーコール密度勾配遠心法を用いて、比重1.077より軽い分画中の細胞を分離した。得られた細胞を単独であるいは肝星細胞と共培養した。タンパク発現を免疫染色法、ウェスタンブロット法で検討した。[結果]肝類洞内皮細胞を特異的に認識するSE-1抗体で分離した骨髄細胞を染色したところ、少数の有核細胞が染色された。さらに、肝星細胞と共培養したところ、その数は培養日数(最長3週間)の経過とともに増加した。骨髄細胞におけるSE-1抗原の発現増加はウェスタンブロット法でも確認できた。[結論]本研究において、骨髄細胞中には肝細胞のみならず肝類洞内皮細胞の前駆細胞も存在していることが示唆された。今回用いた分離法によって、骨髄から肝臓の前駆細胞が得られることが明らかとなり、細胞移植の細胞源として骨髄が有用であることが示された。

[Objective] Liver transplantation に instead of わる therapy と て cell transplantation therapy が consider されて されて る る. Recently に に liver cells, bone marrow cells differentiation で き る stem cells have す が る こ と が report さ れ て い る が に, liver cell differentiation may な less number of bone marrow cells の は very に な く, こ の よ う な を isolated す る に は large-scale が な equipment necessary で あ る. Youdaoplaceholder0 で で, the following is the purpose of this study で を : と た た. (1) the applicant ら が こ れ ま で に establish し て き た routine liver か ら liver stem cells separation を す る method を 発 exhibition さ せ, bone marrow cells よ り more differentiation can keep し を た liver stem cells could promote behavior of fruit を に separation で き る method を open 発 す る. (2) separation し た liver stem cells が short で raised during colonization で き る conditions を see つ け だ し, さ ら に tissue engineering technique を 応 with し て transplantation に optimum し た state に processing し, small where metabolic liver diseases に し seaborne て な treatment services fruit が fully expect で き る stem cell transplants を establish す る. Yesterday's annual の research か ら, bone marrow cells に は ア ル ブ ミ ン を 発 now す る nature of liver cell の を hold っ た cells differentiation may な に が し, こ れ を in vitro で cultivate で き る こ と が わ か っ た. Our は さ ら に, liver cells outside の viscera cells に で き る cells が に exist in bone marrow す る か no か を beg し 検 た. [methods] the healthy often ラ ッ ト thighbone よ り を taken after bone marrow cells, パ ー コ ー ル density hooks with far art を い て, specific gravity 1.077 よ り 軽 い の を isolated points in the picture し た. The られた cells を単 are isolated from である である と hepatic astrocytes と and co-cultured with <s:1> た. Youdaoplaceholder0, パ, パ, を immunostaining method, ウェスタ, ウェスタ, ブロット method で検 for た. [results] liver endothelial cells を specific classes hole に know す る SE - 1 antibodies で separation し た bone marrow cells を dyeing し た と こ ろ, minority の nucleated cell が dyeing さ れ た. Youdaoplaceholder0, hepatic astrocytes と co-cultured たと たと ろ ろ, the number of そ <s:1> and the number of <s:1> culture days (up to 3 weeks) <s:1> increased by とと とと に に. Bone marrow cells におけるSE-1 antigen assay with increased ウェスタ ウェスタ ブロット ブロット method で で confirmation で た た. . [conclusion] this study に お い て, bone marrow cells に は hepatocellular の み な ら ず liver endothelial cells before の 駆 も class hole exists し て い る こ と が in stopping さ れ た. This reuse い た separation に よ っ て, bone marrow か ら が 駆 cells before crucial liver の ら れ る こ と が Ming ら か と な り, cell transplantation の cell source と し て bone marrow が useful で あ る こ と が shown さ れ た.

项目成果

Fu Y, et al.: "Mutation and expression of the p53 gene during chemical hepatocarcinogenesis in F344 rats"Biochim.Biophys.Acta. 1628. 40-49 (2003)

Fu Y等人：“F344大鼠化学性肝癌发生过程中p53基因的突变和表达”Biochim.Biophys.Acta。

Antithrombin III diminishes production of oxygen radical in endotoxin-infused rat lung.

抗凝血酶 III 减少注入内毒素的大鼠肺中氧自由基的产生。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Shock 21
• 作者: Minamiya Y;et al.
• 通讯作者: et al.

Nakata A, et al.: "Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 308. 834-839 (2003)

Nakata A 等人：“自发永生化小鼠成釉细胞谱系细胞系的建立和表征”Biochem.Biophys.Res.Commun. 308. 834-839 (2003)

Expression of copper-transporting P-type adenosine triphosphatase (ATP7B) in human hepatocellular carcinoma

铜转运P型三磷酸腺苷酶（ATP7B）在人肝细胞癌中的表达

• 发表时间: 2004
• 期刊: Anticancer Res. 24
• 作者: Ogawa K.;Sugeno H.;Takebayashi Y.;Higashimoto M.;Ogura Y.;Shibukawa G.;Kanzaki A.;Terada K.;Sugiyama T.;Watanabe K.;Katoh R.;Nitta Y;Fukushima T.;Koyama Y.;Inoue N.;Sekikawa K.;Sato Y.;Takenoshita S.
• 通讯作者: Takenoshita S.

Minamiya Y, et al.: "Antithrombin III diminishes production of oxygen radical in endotoxin-infused rat lung"Shock. 21. 139-143 (2004)

Minamiya Y 等人：“抗凝血酶 III 减少内毒素注入大鼠肺中氧自由基的产生”休克。