ヒトチューブリン発現酵母の構築及びチューブリンと微小管作用薬との相互作用解析

酵母表达人微管蛋白的构建及微管蛋白与微管作用药物的相互作用分析

• 批准号: 12660092
• 负责人: 臼井 健郎
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12660092/
• 关键词: ヒトチューブリン蛋白質; 出芽酵母; 発現系

微小管作用薬の作用領域を同定する目的でチューブリン遺伝子のキメラ遺伝子の作成を試みた。現在知られている薬剤のほとんどがβチューブリンを標的としていることからヒトβチューブリン遺伝子と出芽酵母βチューブリン遺伝子(TUB2)のキメラ遺伝子の作成を行った。キメラ遺伝子作成の為、それぞれの相同な部異に制限酵素サイトを導入し、8ケ所で組み替えが可能なそれぞれのチューブリン遺伝子を作成した。また酵母への導入を確認するためにC末終止コドンの後ろにHIS3マーカーを導入し、チューブリンカセットを作成した。現在発現したチューブリンタンパク質の確認を容易にするためにHAタグの導入を行っている。また遺伝子を導入する酵母としてゲノムのチューブリン遺伝子を破壊し、URA3マーカーのシングルコピーベクターで酵母チューブリン遺伝子を持たせたチューブリンシャッフル株を作成した。現在作成したシャッフル株にチューブリンカセットを導入し株の作成を行っており、導入確認後、5-FOAによるベクター除去を試み、ヒトチューブリン遺伝子発現酵母の作成を行う予定である。

The purpose of determining the field of action of micro-tube is to make a test of the preparation of micro-tube particles Now we know that the production of the protein of TUB2 is carried out by the production of the protein of TUB2. The same part of the restriction enzyme is introduced into the system, and the system is replaced by the system. To confirm the import of yeast, the end of the process should be followed by the import of yeast. Now it is easy to confirm the quality of the product. The yeast is introduced into the cell, and the URA3 cell is introduced into the cell. Now, after the introduction confirmation, the 5-FOA removal test and the preparation of yeast for seed production are scheduled.

项目成果

Usui T, Schiebel E.: "Regulating microtubule properties by modifying their organizing minus ends."Mol Cell. 8. 931-932 (2001)

Usui T，Schiebel E.：“通过修改其组织负端来调节微管特性。”Mol Cell。

H.Watanabe, et al: "Synthesis of pironetin and related analogs : Studies on structure-activity relationships as tubulin assembly inhibitors."J.Antibiot.. 53. 540-545 (2000)

H.Watanabe 等人：“pironetin 和相关类似物的合成：作为微管蛋白组装抑制剂的结构-活性关系的研究。”J.Antibiot.. 53. 540-545 (2000)

Usui T, et al.: "Design and synthesis of a dimeric derivative of RK-682 with increased inhibitory activity against VHR, a dual-specificity ERK phosphatase : implications for the molecular mechanism of the inhibition."Chem Biol.. 8. 1209-1220 (2001)

Usui T 等人：“设计和合成 RK-682 二聚衍生物，对 VHR（一种双特异性 ERK 磷酸酶）具有增强的抑制活性：对抑制分子机制的影响。”Chem Biol.. 8. 1209

H.Wang, et al: "Synthesis and evaluation of tryprostatin B and demethoxyfumitremorgin C analogs."J.Med.Chem.. 43. 1577-1585 (2000)

H.Wang 等人：“胰前列腺素 B 和去甲氧基夫米特莫金 C 类似物的合成和评价。”J.Med.Chem.. 43. 1577-1585 (2000)

長田裕之 他: "微小管機能に関与する蛋白質とその低分子阻害剤"バイオサイエンスとインダストリー. 58. 789-792 (2000)

Hiroyuki Nagata 等人：“参与微管功能的蛋白质及其小分子抑制剂”《生物科学与工业》58. 789-792 (2000)。