アンジオテンシンIIタイプ2受容体特異的シグナル伝達物質のクローニング、機能解析

血管紧张素II 2型受体特异性信号转导器的克隆和功能分析

• 批准号: 12877112
• 负责人: 堀内 正嗣
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877112/
• 关键词: アンジオテンシン; 受容体; シグナル; クローニング; アポトーシス; キナーゼ; 脱リン酸化酵素; 心血管リモデリング

アンジオテンシンIIタイプ1(AT1)受容体とアンジオテンシンIIタイプ2(AT2)受容体の発現バランス、クロストークが心血管病態において重要であることが認識され、その病態生理学的意義の解明が急がれている。AT2受容体も、AT1受容体と同様に7回膜貫通型受容体であり、膜貫通部位を除いてAT1受容体とその相同性は低く、全体として約34%の相同性を有している。AT1受容体が、Extracelluar signal-regulated kinases (ERK)をはじめ、種々のキナーゼを活性化するのに対し、AT2受容体は、SHP-1,MKP-1などの脱リン酸化酵素を活性化し、AT1受容体によるシグナルのブレーキとして、作用し、細胞増殖抑制、アポトーシス誘導等に働くと報告してきた。また、なかでも、SHP-1が、AT2受容体のシグナル特異性を決定するサードループに直接、リンクする可能性についても報告した。AT2受容体刺激によるSHP-1活性化の生理的意義について更に検討を行ったところ、SHP-1は、Epidermal Growth Factor (EGF)の脱リン酸化を促進したり、さらにインスリン受容体によるP13 Kinaseの不活性化に関与していることが見いだされ、SHP-1がAT2受容体を介する種々の生理作用に重要であることが明らかとなった。AT2受容体細胞内サードループアフィニテイカラムなどを用いた精製を試み、現在、37kDa,70kDaの2種類の異なった蛋白を得たので、アミノ酸配列等を確認しつつあり、70kDaの蛋白がAT2受容体の細胞内サードループに特定的に結合する可能性を示唆する結果を得ている。一部のシーケンスを用いcDNAをクローニングする予定である。同時に、High Throughput Screeningを行うべく、準備を進めている。さらに、AT1受容体のC-末端のみに特異的に結合するAT1 receptor associated protein (ATRAP)をクローニングし、ATRAPがAT1受容体に特徴的なインターナリゼイション、デセンシタイゼイションを引き起こし、血管平滑筋の増殖能を抑制する事、さらにATRAPが血管傷害、心肥大時にその発現が減少する事を報告してきたが、現在、その機能の解析を進めている。

ア ン ジ オ テ ン シ ン II タ イ プ 1 (AT1) by the capacity of body と ア ン ジ オ テ ン シ ン II タ イ プ 2 (AT2) by the capacity of body の 発 now バ ラ ン ス, ク ロ ス ト ー ク が cardiovascular pathological に お い て important で あ る こ と が know さ れ, そ の pathological physiology の interpret the meaning of が urgent が れ て い る. AT2 let body も, AT1 with others in the capacity of body と に type 7 transmembrane back by let body で あ り and transmembrane を except い て AT1 by let body と そ の identity は low く, all と し て about 34% gay を の are し て い る. AT1 acceptor が, Extracelluar signal-regulated kinases (ERK) を は じ め, kind of 々 の キ ナ ー ゼ を activeness す る の に し seaborne, AT2 let は, SHP - 1, MKP 1 な ど の リ off ン を acidification enzyme activeness し, AT1 let body に よ る シ グ ナ ル の ブ レ ー キ と し て, role し, inhibiting cell rights colonization, ア ポ ト ー シ ス induced etc に 働 く と report し て き た. ま た, な か で が も, SHP - 1, AT2 let body の シ グ ナ ル specificity を decided す る サ ー ド ル ー プ に directly, リ ン ク す る possibility に つ い て も report し た. Under let body AT2 に よ る activeness の physiological significance of SHP - 1 に つ い て more に 検 line for を っ た と こ ろ, は SHP - 1, Epidermal Growth Factor (EGF) の リ off ン acidification を promote し た り, さ ら に イ ン ス リ ン by let body に よ る P13 Kinase の not activeness に masato and し て い る こ と が see い だ さ れ, SHP - 1 が AT2 を interface by let body す る kind 々 の physiology に important で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. AT2 within let somatic サ ー ド ル ー プ ア フ ィ ニ テ イ カ ラ ム な ど を with い た refined を try み, now, 37 kda, 70 kda の 2 kinds の different な っ た protein を must た の で, ア ミ ノ acid with column を confirmation し つ つ あ り, 70 kda protein の が AT2 by let body の intracellular サ ー ド ル ー プ に specific に combining す る possibilities Youdaoplaceholder0 shows する result を て る る る. A piece of <s:1> シ ケ ケ ケ スを スを using the cDNAを を ロ ニ ニ ニ グする グする である is given である. At the same time, に, High Throughput Screeningを goes through うべく, prepare を into めて めて る る. Youdaoplaceholder0, the <s:1> c-terminal <s:1> of the AT1 receptor みに specifically に binds to するAT1 receptor associated protein (ATRAP) を ク ロ ー ニ ン グ し, ATRAP が AT1 by let body に te 徴 な イ ン タ ー ナ リ ゼ イ シ ョ ン, デ セ ン シ タ イ ゼ イ シ ョ ン を lead き up こ し, vascular smooth muscle の raised colonization can suppress す を る, さ ら に ATRAP が vascular injury, heart hypertrophy に そ の 発 が now reduce す る matter を report し て き た が, now, Youdaoplaceholder0 <s:1> function <e:1> analysis を into めて る る.

项目成果

Nakagami, H., Cui, T.X., Iwai, M., Shiuchi, T., Takeda-Matsubara, Y., Wu, L., Horiuchi, M.: "Tumor Necrosis Factor-α Inhibits Growth Factor-Mediated Cell Proliferation Through SHP-1 Activation in Endothelial Cells"Arterioscler Thromb Vasc Biol.. 22. 238-2

Nakagami, H.、Cui, T.X.、Iwai, M.、Shiuchi, T.、Takeda-Matsubara, Y.、Wu, L.、Horiuchi, M.：“肿瘤坏死因子-α 通过抑制生长因子介导的细胞增殖内皮细胞中的 SHP-1 激活“动脉硬化血栓 Vasc Biol.. 22. 238-2

Cui, T.X., Nakagami, H., Takeda, Y., Shiuchi, T., Daviet, L., Nahmias, C., Horiuchi, M.: "Pivotal role of tyrosine phosphatase SHP-1 in AT2 receptor-mediated apoptosis in rat fetal vascular smooth muscle cell"Cardiovasc Res.. 49・4. 863-871 (2001)

Cui, T.X.、Nakagami, H.、Takeda, Y.、Shiuchi, T.、Daviet, L.、Nahmias, C.、Horiuchi, M.：“酪氨酸磷酸酶 SHP-1 在 AT2 受体介导的细胞凋亡中的关键作用大鼠胎儿血管平滑肌细胞”Cardiovasc Res.. 49・4. 863-871 (2001)

Cui,T,-X.,Nakagami,H.,Iwai,M.,Takeda,Y.,Shiuchi,T.,Daviet,L.,Nahmias,C.,Horiuchi,M.: "Pivotal role of Tyrosine Phosphatase SHP-1 in AT2 Receptor-mediated Apoptosis in Rat fetal Vascular Smooth Muscle Cell."Cardiovasc Res.. 279. 938-941 (2000)

Cui,T,-X.,Nakagami,H.,Iwai,M.,Takeda,Y.,Shiuchi,T.,Daviet,L.,Nahmias,C.,Horiuchi,M.：“酪氨酸磷酸酶 SHP 的关键作用

Cui, T.X., Nakagami, H., Iwai, M., Takeda, Y., Shiuchi, T., Tamura, K., Daviet, L., Horiuchi, M: "ATRAP, novel AT1 receptor associated protein, enhances internalization of AT1 receptor and inhibits vascular smooth muscle internalization of AT1 receptor an

Cui, T.X.、Nakagami, H.、Iwai, M.、Takeda, Y.、Shiuchi, T.、Tamura, K.、Daviet, L.、Horiuchi, M：“ATRAP，新型 AT1 受体相关蛋白，增强

Takeda-Matsubara, Y., Nakagami, H., Iwai, M., Cui, T.X., Shiuchi, T., Akishia, M., Nahmias, C., Ito, M., Horiuchi, M.: "Estrogen Activates Phosphatases and Antagonizes Growth-Promoting Effect of Angiotensin II"Hypertension. 39. 41-45 (2002)

Takeda-Matsubara, Y.、Nakagami, H.、Iwai, M.、Cui, T.X.、Shiuchi, T.、Akishia, M.、Nahmias, C.、Ito, M.、Horiuchi, M.：“雌激素激活磷酸酶