AT2受容体に特異的な血管分化,リモデリング関連分子,転写調節因子の同定と機能解析

AT2受体特异性血管分化、重塑相关分子和转录调节因子的鉴定和功能分析

• 批准号: 02F00533
• 负责人: 堀内 正嗣
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00533/
• 关键词: アンジオテンシンII; 受容体; 血管平滑筋; 細胞増殖; 血管リモデリング; 転写調節因子; 遺伝子発現; プロモーター; 血管分化; 血管平滑筋細胞; 血管内皮細胞

本年度は、AT2受容体の細胞内作用機構について探求するため実施計画に基づき以下に述べる実験を行い新たな研究成果を得た。まずMCP-1発現調節におけるAT2受容体の作用機構をラット大動脈より分離した培養血管平滑筋細胞を用いて検討した。胎生期の血管平滑筋にはAT1受容体に加えてAT2受容体が発現している。この培養細胞をアンジオテンシンIIで刺激するとNorthern blotにてMCP-1mRNA量が濃度依存性に増加し、Gel mobility shift assayによる検討でNF-κBのMCP-1のプロモーター領域への結合が促進した。また、アンジオテンシンIIはNF-κBの阻害因子である細胞内IκB含量を低下させた。アンジオテンシシIIの作用はAT1受容体ブロッカーにより抑制されAT2受容体ブロッカーにより増強した。さらに、SHP-1変異遺伝子のtransfectionはAT2受容体刺激によるMCP-1遺伝子発現調節とそのシグナル伝達因子を抑制することが判明した。これらの結果から、AT1受容体刺激とAT2受容体刺激は血管平滑筋細胞からのMCP-1遺伝子発現に対して、転写調節因子レベルで拮抗的に調節作用を有することが示唆される。また、AT2受容体遺伝子の発現調節機構を検討するため、胎生期および新生児期の血管平滑筋細胞を分離培養するとAT2受容体結合能は16日より増加し、胎生20日にピークとなり、新生児期以降は激減した。AT2受容体遺伝子の発現調節を調べるため、AT2受容体遺伝子のプロモーター領域をさまざまな範囲にわたって欠如した変異DNAを作成し、レポーター遺伝子(ルシフェラーゼ)を結合させた後、平滑筋細胞にtransferして遺伝子発現を検討すると、胎生20日目の平滑筋細胞において-755/-334の領域を欠如した変異プロモーターでAT2受容体の発現が著しく低下したことから、この領域がAT2受容体の発現調節に需要であると考えられた。さらに、ラットのバルーン血管傷害モデルの大動脈から分離培養した血管平滑筋細胞を用いて同様の実験を行うと、AT1受容体結合能は傷害後にも変化しなかったが、AT2受容体結合能は傷害7日目に増加した。この細胞では、-755/-334の領域を欠如した変異プロモーターによってもAT2受容体遺伝子発現は抑制されなかった。この結果は、傷害血管におけるAT2受容体の再発現調節は、胎生期における同受容体の発現調節とはメカニズムが異なると推測される。

This year, new research results were obtained in the exploration of intracellular mechanisms of AT2 receptors. The mechanism of MCP-1 expression regulation in AT2 receptors was studied by isolating vascular smooth muscle cells from cultured cells. The vascular smooth muscle in the fetal period is added to the AT1 receptor, and the AT2 receptor appears in the middle. Northern blot results showed that MCP-1mRNA levels increased in a concentration-dependent manner, and the binding of NF-κB and MCP-1 mRNA in the protein domain was promoted by Gel mobility shift assay. The expression of NF-κB in cells was significantly reduced due to the inhibition of NF-κB. The role of AT1 receptor II is to inhibit AT2 receptor development. In addition, SHP-1 gene transfection was found to be regulated by AT2 receptor stimulation and inhibited by MCP-1 gene expression factors. These results suggest that both AT1 receptor stimulation and AT2 receptor stimulation have antagonistic regulatory effects on the expression of MCP-1 gene in vascular smooth muscle cells. The regulation mechanism of AT2 receptor gene expression was discussed. The binding energy of AT2 receptor increased at 16 days of gestation and decreased at 20 days of gestation. AT2 receptor gene expression regulation, AT2 receptor gene expression regulation, AT2 receptor gene expression On the 20th day of birth, the smooth muscle cells were divided into-755/-334 areas, and the AT2 receptor was developed in different ways. In addition, AT1 receptor binding energy decreased after injury, AT2 receptor binding energy increased after injury. This cell line has a range of-755/-334 cells, and the AT2 receptor gene expression is inhibited. The results showed that AT2 receptor regeneration was regulated by vascular injury, and the same receptor regeneration was regulated by fetal period.

项目成果

Li, J-M., Cui, T-X., Shiuchi, T., Liu, H-W., Min, L-J., Wu, L., Horiuchi, M., et al.: "Nicotine enhances angiotensinII-induced mitogenic response in vascular smooth muscle cells and fibroblasts."Arterio Thromb Vasc Biol. 24. 80-84 (2004)

Li, J-M., Cui, T-X., Shiuchi, T., Liu, H-W., Min, L-J., Wu, L., Horiuchi, M., et al.：“尼古丁增强血管紧张素 II 诱导的血管平滑肌有丝分裂反应