遺伝性眼底疾患におけるエキソントラップ法によるスプライス変異の解析

利用外显子陷阱法分析遗传性眼底疾病的剪接突变

• 批准号: 12877279
• 负责人: 伊佐敷 靖
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877279/
• 关键词: 遺伝性眼底疾患; 変異動態; エキソントラップ法; ゲノムDNA

遺伝性眼底疾患では病変部位の発現試料を得ることが困難なので、ゲノムDNA試料にエキソントラップ法を応用して、スプライス変異例における翻訳動態の解析を試みた.遺伝性網膜ジストロフィSorsby's fundus dystrophyの疾病遺伝子(TIMP3)のスプライス受容部位挿入変異例、REP1遺伝子のスプライス供与部位変異陽性のコロイデレミア症例およびCYP1BI遺伝子のブレームシフト変異陽性の先天緑内障症例を検索対象とした.ゲノムDNA試料から、それぞれの変異部位および周辺のエキソンを含む領域を単一断片として増幅し、エキソントラップベクターの2個のエキソンの間に挿入した.挿入型のエキソントラップベクターをCOS細胞内で発現させ、転写後のRNAからcDNA断片を回収して、その塩基配列を決定した.TIMP3変異例では、エキソン5の転写が無視されて、エキソン4の直後にエキソントラップベクター固有の第2エキソンの塩基配列が解読された.REP1遺伝子スプライス供与部位変異例ではエキソンのスキップが、CYP1BI遺伝子の一塩基挿入変異例ではフレームシフト効果による異常な終止コドンの新生がおこることが推察されるが、エキソントラップ法でみる限りでは、短縮されたcDNA断片を確認できなかった.TIMP3遺伝子の場合には変異部位以降の遺伝子にスキップがおこることが確認され、エキソントラップ法が変異動態解析に有用であることが示された.一方、REP1遺伝子およびCYP1BI遺伝子の場合には異常断片を検出できなかった.遺伝子およびその変異の性状に応じて、メッセージを解読するような他の方法を検討する必要がある.

The diagnosis of fundus disease, the part of the disease, the material of the fundus disease, the part of the disease, the disease, the disease

项目成果

Isashiki Y, Ohba N, Nakagawa M, Izumo S: "Optic neuropathy and cerebellar ataxia associated with a rare missense variation(A14510G) of mitochondrial DNA"British Journal of Ophthalmology. 85. 1009-1010 (2001)

Isashiki Y、Ohba N、Nakakawa M、Izumo S：“与线粒体 DNA 的罕见错义变异 (A14510G) 相关的视神经病变和小脑性共济失调”英国眼科杂志。

Kakiuchi-Matsuumoto T, Isashiki Y, Ohba N, Kimura K, et al.: "Cytochrome P450 1B1 gene mutations in Japanese patients with primary congenital glaucoma"American Journal of Ophthalmology. 131. 345-350 (2001)

Kakiuchi-Matsuumoto T、Isashiki Y、Ohba N、Kimura K 等人：“日本原发性先天性青光眼患者的细胞色素 P450 1B1 基因突变”美国眼科杂志。

Kakiuchi-Matsumoto T,Isashiki Y,Ohba N,Kimura K, et al.: "Cytochrome P450 1B1 gene mutations in Japanese patients with primary congenital glaucoma."American Journal of Ophthalmology. 131(in press). (2001)

Kakiuchi-Matsumoto T、Isashiki Y、Ohba N、Kimura K 等人：“日本原发性先天性青光眼患者的细胞色素 P450 1B1 基因突变。”美国眼科杂志。

Isashiki Y, Kii Y, Ohba N, Nakagawa M: "Retinopathy associated with Machado-Joseph disease (spinocerebellar ataxia 3 with CAG trinucleotide repeat expansion"American Journal of Ophthalmology. 131. 808-810 (2001)

Isashiki Y、Kii Y、Ohba N、Nakakawa M：“与 Machado-Joseph 病相关的视网膜病（脊髓小脑性共济失调 3 与 CAG 三核苷酸重复扩张”）美国眼科杂志。131. 808-810 (2001)

Isashiki Y,Kii Y,Ohba N,Nakagawa M: "Retinopathy associated with Machado-Joseph disease (spinocerebellar ataxia 3) with CAG trinucleotide repeat expansion."American Journal of Ophthalmology. 131(in press). (2001)

Isashiki Y、Kii Y、Ohba N、Nakakawa M：“与具有 CAG 三核苷酸重复扩张的 Machado-Joseph 病（脊髓小脑性共济失调 3）相关的视网膜病。”美国眼科杂志。